Determinación de proteínas: Método de Kjeldahl.

Determinar el contenido de nitrógeno en muestras orgánicas e inorgánicas para la cuantificación de las proteínas.

Mineralización de la materia orgánica con ácido sulfúrico obteniéndose nitrógeno inorgánico (sulfato de amonio).
Luego se neutraliza con hidróxido liberándose amoniaco que se recibe en solución ácido bórico
Finalmente se valora con una solución patrón de ácido.

1° Técnica

Etapas

DIGESTIÓN

OBJETIVO

Romper todos los enlaces de N de la muestra y convertir todo el N unido orgánicamente en iones amonio.

REACTIVOS

-Ácido Sulfúrico 95‐98%
-Catalizador Kjeldahl

EQUIPOS

-Balanza analítica
-Digestor de Kjeldahl
-Scrubber lavador de gases.

TIEMPO/
TEMPERATURA

400ºC/30minutos

DESTILACIÓN

OBJETIVO

Convertir lo iones amonio en amoniaco mediante la adición de NaOH.

REACTIVOS

-Ácido bórico, solución al 4%
-Indicador mixto
-NaOH, solución 35%

EQUIPOS

Destilador de Kjeldahl

TIEMPO/
TEMPERATURA

Debe prolongarse el tiempo suficiente para que se destilen un mínimo de 150 mL, aproximadamente de 5 a 10 minutos.

TITULACIÓN

OBJETIVO

Realizar una titulación acido- base, para calcular la concentración de N y con el factor podremos expresarlo en porcentaje de proteínas.

REACTIVOS

HCl 0,31 N

EQUIPOS

-Equipo de titulación

Cuidados

 Calentamiento a T° inferior a la de ebullición hasta que cese la formación de espuma
 Durante el ataque es conveniente colocar el embudo en la boca del balón
 Cuando se enfría el balón y se diluye hay que tener cuidado con las proyecciones que se pueden producir.
 Al alcalinizar verter con cuidado para evitar pérdidas de NH3.
 Al agregar las gotas de naranja de metilo se debe tener la precaución de que el burbujeo se produzca bajo la superficie del ácido.

Cálculos

%Nitrogeno= [1,4 x (V1-V0) x N]%P

%Proteína= %Nitrógeno x F

Factores

Factor de conversión (k): para pasar de contenido en nitrógeno ha contenido en proteínas. La mayoría de las proteínas contienen un 16% de N2, de modo que el factor de conversión es 6,25 (100/16 = 6,25), pero se han obtenido empíricamente otros factores de conversión en función de la materia prima utilizada.

2° Técnica

Cuidados

 Hacer el calentamiento en baño de arena a temperatura inferior a la de ebullición hasta que cese la formación de espuma
 Durante el ataque es conveniente colocar el embudo en la boca del balón para condensar los vapores de NH3 que se desprenden (trabajar bajo campana).
 Cuando se enfría el balón y se diluye hay que tener cuidado con las proyecciones que se pueden producir.

 Al alcalinizar verter con cuidado para evitar pérdidas de NH3.

 Al agregar las gotas de naranja de metilo se debe tener la precaución de que el burbujeo se produzca bajo la superficie del ácido.

Cálculos

𝑔%N2={[(VxN) H2SO4 − (VxN) NaOH] 𝑥meqN2 }% 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥100

meqN2 = 0,023 mg/meq

16g N2 -----------------100g proteína animal

1 g N2 ------------------ x = 6,25 g (factor que se halla en bibliografía)

1g N2 ------------------ 6,25 g proteína animal

g % N2 ---------------- x = g% proteínas