El diagnóstico viral por el laboratorio

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El diagnóstico viral por el laboratorio

Pruebas de susceptibilidad viral

Depende de varios factores: tipo de prueba, línea celular, laboratorio, etc

Para obtener una prueba de susceptibilidad primero es necesario un aislamiento viral

Son importantes para razones clínicas (epidemiológicas)

Conclusiones

La demostración directa de antígenos ayuda al diagnóstico, pronóstico y seguimiento de la infección para un adecuado tratamiento

Esto nos ayudará a brindar una interpretación adecuada

Estas pruebas debe acompañarse de un óptimo nivel técnico para una adecuada recolección y almacenamiento de la muestra

Introducción

Este diagnóstico puede darse

De forma indirecta

Demuestran un contacto del huésped con el agente viral

De forma directa

Son virus que pueden encontrarse presentes en los tejidos o fluidos humanos

Un diagnóstico adecuado permite conocer la epidemiología y tomar medidas adecuadas de prevención

El laboratorio es de gran ayuda para conocer su etiología

Es importante conocer la etiología viral ya que determina un cambio de conducta clínico

Técnicas para el diagnóstico viral

Técnicas indirectas para el descubrimiento viral

c) Los que miden directamente la interacción antígeno-anticuerpo

b) Los que miden la capacidad de los anticuerpos para bloquear la función viral específica

a) Los que dependen de la capacidad del anticuerpo que se une al antígeno para ejercer alguna función no relacionada con el virus

La reacción se da entre antígeno-anticuerpo

Técnicas directas para la demostración viral

Pruebas para la demostración directa del antígeno

Técnicas de diagnóstico molecular

Técnicas para la amplificación del ácido nucleico

Ensayo de transcriptas reversa

Prueba aplicada a los retrovirus

ADN ramificado (branched) o bADN

Es un sistema de amplificación, donde se amplifica es la señal en lugar del blanco de ácido nucleico, esto se realiza mediante pasos sucesivos de hibridización

Sistema QB replicasa

La replicasa replica el ARN del bacteriófago

Reacción en cadena de la lipasa o LCR

Su empleo es para el diagnóstico (mycobacterium tuberculosis, borrelia burgdorferi, neisseria gonorrohoeae y N. meningitidis)

Reacción en cadena de la polimerasa

Pasos

La extensión de estos cebadores por la enzima ADN polimerasa (72ºC)

La hibridización de los cebadores (a 55ºC)

La desnaturalización del ADN en la muestra, lo que se logra al someterlo a 95ºC para lograr separar las cadenas

Se pueden encontrar cantidades mínimas de un agente infeccioso

Ensayos de hibridización

Se usa para confirmar la identificación de un virus en cultivo o descubrirlo directamente desde una muestra

Inmunoensayos; ensayos de captura de antígeno (sandwich), inmunocromatografía

Mediante el uso del suero se trata de demostrar la relación antígeno-anticuerpo

Inmunofluorescencia directa

Esta técnica es específica para cada antígeno que se desea descubrir

La demostración de antígeno se realiza mediante la utilización de un anticuerpo marcado con un fluorocromo

Aglutinación de látex

Son esfera de poliestireno que se une a las moléculas de IgG o IgM

Facilita descubrir antígenos virales que se encuentran en los tejidos del huésped

Aislamiento viral en cultivo

Líneas celulares

Derivan de tejidos normales y tumores malignos

Resisten "n" nùmero de pases

Son células inmortalizadas en laboratorio

Cepas de células diploides

Se usan en la producción de vacunas

Derivan de tejidos normales

Cultivos primarios

Resisten 5 a 10 subcultivos

Son de crecimiento limitado in vitro

Tienen varios tipos de células

Es una buena técnica para diagnóstico de infecciones virales asintomáticas

Visualización de la partícula viral

Microscopía electrónica; se visualiza la partícula viral gracias a la resolución del microscopio

Microscopía de luz; se efectúa mediante tinciones especiales (coloraciones)

La toma de muestras

Consideraciones de la muestra

Se puede utilizar algunos criopreservantes (dimetil sulfóxido, suero, leche descremada, proteínas, sacarías, glicerol y sorbitol)

Si el proceso dura 4 días, se congelan a -70ºC

Si se guarda en una nevera entre 4 a 8ºC

No se recomienda congelar y descongelar las muestras (alteran la estructura viral)

No dejarlo al medio ambiente o en incubadora

Factores de la muestra

Medio de preservación

Temperatura

Tiempo de transporte de la muestra

Consideraciones de la toma de muestra del paciente

Historia clínica

Fecha y hora

Tipo de muestra

Lugar de procedencia

Nombre del paciente

Se da en cultivos celulares y condiciones de completa esterilidad

Si esta muestra es baja se pierde la posibilidad de infectar las células vivas

Es aislamiento viral de una muestra adecuada