INMUNOANÁLISIS

INMUNOANÁLISIS DE PARTÍCULAS

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Se emplean partículas tales como eritrocitos, armazones de látex y de poliglicilmetacrilato, sales de oro y sales de colorante en dispersión, como marcadores para el antígeno y el anticuerpo (Van Hell, 1985).

Consta de

PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS

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La aglutinación es una reacción serológica clásica que comprende la aglomeración de una suspensión celular mediante un anticuerpo específico. Las reacciones con antígenos solubles se pueden adaptar a las pruebas de aglutinación mediante el recubrimiento o acoplamiento covalente del antígeno o del anticuerpo específico a un transportador corpuscular.Sus ventajas son el alto grado de sensibilidad y la gran cantidad de antígenos que se pueden detectar mediante el uso de partículas recubiertas de antígeno o de anticuerpo.

Que pueden ser

DIRECTAS

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Aglomeración de células o de una suspensión de partículas insolubles, como bacterias, hongos u otros organismos, mediante anticuerpos específicos. La agregación se produce por anticuerpos que poseen dos o más receptores de conjugación para fijar las células o partículas. La reacción es posible con Antígenos sobre la superficie celular o cerca de ella.

INDIRECTAS

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Implica la aglutinación de células o partículas inertes recubiertas de antígenos o anticuerpos solubles. Las células o partículas inertes son portadores pasivos y los antígenos pueden ser absorbidos físicamente o acoplados covalentemente a la superficie. Pueden emplearse hematíes humanos o partículas inertes como: Bentonita, látex, colodión y carbón vegetal.

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ANTIGLOBULINAS

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Descrita inicialmente por Moreschi en 1908 y redescubierta por Coombs y col en 1945 para demostrar la presencia de anticuerpos incompletos frente a los antígenos de los hematíes. Los Anticuerpos incompletos como la IgG anti-Rhᵒ no producen aglutinación en una suspensión salina de eritrocitos homólogos.

Aplicación médica

TIPIFICACIÓN ABO

DETECCIÓN DE ENFERMEDADES AUTOINMUNES

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Situaciones donde los anticuerpos (Ac) se unen a los glóbulos rojos.

CITOMETRÍA DE FLUJO

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Método rápido objetivo y cuantitativo de análisis de células/componentes. Determina parámetros celulares, la etapa de maduración o el estado de activación de la célula a través de marcación con fluorocromos.

Su principio es

Hacer pasar a las células en suspensión alineadas frente a un haz de luz.

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Se produce información generada por la dispersión de luz y relacionada a la emisión de luz por los fluorocromos presentes.

PARÁMETROS

Nucleares

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Contenido de ADN/ARN/proteinas totales/antigenos nucleares/antigenos celulares.Contenido de pares GC/AT.Superenrollamiento de ADN.Estructura de la cromatina.Roturas de hebras de ADN.Receptores nucleares.Regulacion del ciclo celular.Apoptosis y necrosis.

Citoplasmicos

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Proteinas totales/estructurales/funcionales.Glicoproteinas intracelulares.Lipidos intracelulares.Actividad enzimatica.Sintesis de proteinas.Potenciales de membrana.Concentracion y movimiento de iones.

De superficie

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Receptores de superficie.Sitios de union a lectinas.Pared celular.Densidad de una superficie.

Extracelulares

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Captura de proteinas secretadas.Diferenciacion celular.Activacion celular.

APLICACIÓN MÉDICA

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Inmunofenotipificación: Hematología e inmunología clínicas, mide parámetros como número y clasificación de células sanguíneas.

VIH

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Conteo de subpoblaciones de linfocitos.

Leucemias agudas

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Reconocer a través de anticuerpos los marcadores específicos de los estadios madurativos de los linfocitos B o T, o de las células mieloides infiltradas en la médula ósea.

Síndromes linfoproliferativos crónicos

Enfermedades pulmonares inmunológicas

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Determinar la proporción relativa de linfocitos, macrófagos y granulocitos a partir de gráficas de tamaño contra complejidad celular.

Trombocitopenia inmunitaria

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Identificación, cuantificación y caracterización de inmunoglobulinas unidas a plaquetas usando antisueros IgG e IgM anti-humanos.

TÉCNICA

Se realiza tiñendo las células con sondas marcadas con fluorescencia específica frente a esas moléculas y se mide la cantidad ligada por cada célula integrante de la población después de pasarlas a través de un fluorímetro.

Sus componentes son

FUENTE DE LUZ

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En general es un rayo láser, por tratarse de una fuente de luz altamente direccionada, monocromática, coherente e intensa. La luz emitida, además, está concentrada en un haz estrecho. La mayoría de los citómetros actuales disponen de un láser de ión argón. 

CAMARA DE FLUJO

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En la que se orienta el flujo de células y se consigue el paso de éstas en forma individual. 

SISTEMA OPTICO

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Constituido por lentes, espejos dicroicos y filtros, que enfocan el haz de luz para iluminar la muestra y descomponen la emisión de fluorescencia en sus componentes individuales. 

FOTOMULTIPLICADORES

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Detectan y convierten las señales luminosas en impulsos eléctricos y estos en señales digitales. 

ORDENADOR

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Para adquisición, almacenamiento y análisis de los datos en tiempo real o en modo de matriz de datos.