Micropropagação
Conceitos
A micropropagação é um método de propagação vegetativa amplamente
estudado em diversas espécies vegetais.
Permite a regeneração de uma planta inteira a partir de um segmento de uma planta matriz
Baseia-se no princípio de totipotência
das células vegetais, isto é, no seu potencial de produzir órgãos ou embriões que originarão uma planta inteira, desde que em condições de cultivo adequadas
Aplicações
Regeneração por
cultura de tecidos
Possibilita transformações
genética
Manuntenção de coleções de plantas
com genótipos diferentes
Criação de mudas livre de patógenos
Acelera programas
de melhoramento
Cultivo de mudas independente
das condições ambientais
Produção massiva de plantas
Clonagem in vitro
Fatores que influem
na micropropagação
Seleção de explantes
- Qualquer tecido é capaz de expressar a totipotência
- Geralmente utilizados explantes de tecidos jovens
- Tecidos maduros também podem ser usados, porém são menos preteridos que tecidos jovens
- Tamanhos podem variar de 0,2 a 20mm ou mais.
- O tipo de explante utilizado determina, muitas vezes, o grau de sucesso na micropropagação.
- Devem preferencialmente ser retirados de plantas que não estejam passando por estresse
- Explantes mais utilizados: caulinares, gemas axilares e meristemas
Desinfecção
Tratemento pode começar na planta matriz
As vias de desinfeção envolvem normalmente: autoclavagem dos instrumentos; tratamento da planta matriz com antibióticos/antifúngicos; desinfecção dos instrumentos e explantes envolvendo álcool, hipoclorito de sódio e água destilada.
Desinfecção dos instrumentos
Desinfecção dos explantes
Contaminação
Principal problema quanto ao cultivo. Pode decorrer pela presença de fungos ou bactérias no meio devido a desinfecção incorreta ou ineficiente
Oxidação
Oxidação fenólica
A ocorrência depende do gênero e da espécie trabalhada
Muda conforme o explante selecionado
Adição de carvão ativado e antioxidantes pode reduzir a taxa de oxidação
Meios de cultura
o meio deve conter todas
as fontes de micro e macronutrientes
Serve também como suporte físico
Contém reguladores de crescimento
Fonte de CO2 e O2 para a planta
Reguladores de crescimento
Podem inibir ou estimular o crescimento
Mais utilizados: auxinas, citocininas e giberilinas
Escolha do regulador dependerá da espécie e da morfogênese desejada
Auxina: estimula formação de calos, gemas e raízes
Citocinina: estimula a divisão celular e a formação da parte aérea
Podem se apresentar em fase líquida, sólida ou bi-fásica
Problemas
Requer instalações
e equipamentos
especializados;
Por se tratar de uma
técnica cara, há
impedimentos financeiros
Necessita de uma
maior capacitação
tecnológica
A mão de obra especializada necessária
pode ser cara ou indisponível
Protocolos regenerativos
não disponíveis à todas
as espécies
Algumas espécies não respondem
à CT, essas são denominadadas de
recalcitrantes.
Laboratórios caros
Variação somaclonal
Mutações podem ocorrer e alterar
o genoma de maneira a prejudicar
a obtenção de clones
Aclimatação
A planta pode morrer na
transferência para o solo
Microenxertia
Aplicações
Usa como base o conceito da técnica
de enxertia: na qual temos um "porta enxerto" que serve de base para um "enxerto" se desenvolver.
Porta-enxerto: obtido através da
germinação in vitro
Microenxerto: obtido através da excisão
do ápice meristemático de gemas laterais
Metodologia para
a realização de
microenxertia
I - Obtenção do
Porta -enxerto
e do microenxerto
II - O epicótilo do porta-enxerto é excisado
III - É realizado um corte em "T" invertido no epicótilo
IV - Transferência do meristema para a
base em "T"
V- Aclimatação da planta