por Lucas minatelli montillla hace 3 años
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Se siembra con ansa previamente esterilizada a la llama (flameada), que se humedece con la suspensión microbiana o la muestra y abriendo la caja apenas lo necesario, cerca del mechero, se hacen seis trazos paralelos en la superficie del medio. Los trazos deben quedar separados entre sí, luego de cada uno, se levanta el ansa para hacer el siguiente. El ansa queda cada vez más empobrecida en microorganismos y luego de la incubación se formarán colonias separadas por lo menos en el último trazo. Las cajas sembradas se incuban con la tapa hacia abajo, para evitar la desecación del medio
Agregar a la caja de Petri el medio adecuado (plaquear), esterilizado y enfriado a 45°- 50°C. Se saca el tapón de algodón, flamea la boca de tubo y vuelca rápidamente en una caja de Petri estéril apenas abierta, dando un leve movimiento circular para que se distribuya por toda la superficie y se deja solidificar.
Esta técnica se utiliza para el control microbiológico de aguas, vinos, jugos, mostos concentrados entre otros. Permite concentrar los microorganismos presentes analizando un elevado volumen de muestra. Los microorganismos quedan retenidos sobre la superficie de la membrana filtrante. Luego se coloca la membrana sobre un medio de cultivo que difunde por capilaridad y proporciona los nutrientes necesarios para que los microorganismos desarrollen formando colonias visibles.
En el método de siembra por vertido en placa o Pour plate se procede a depositar 1 ml de cada dilución en placas estériles, vacías y por duplicado. Posteriormente se agrega a cada placa 15 a 20 ml de medio de cultivo a emplear, previamente fundido y termostatizado a 45 ºC en baño de maría. Se agita moviendo la placa tapada sobre la superficie de la mesa con movimiento circular. Así, la muestra se mezcla con el medio de agar. Luego se incuba la muestra en forma invertida y , después del tiempo de incubación en estufa se retiran las placas y se cuentan las colonias desarrollas por placa
SIEMBRA
Se siembra un determinado volumen (0,1 o 1 ml) de muestra o suspensión sobre la superficie de un medio de cultivo sólido y estéril y se esparce por toda la caja por medio de una varilla de vidrio en L o espátula de Drigalsky. SE deja que la muestra dispersa se absorba en la superficie del agar, se invierte la placa y se incuba en estufa a la temperatura apropiada. Luego del tiempo de incubación en estufa se retiran las placas y se cuentan las colonias desarrollas por placa. Se distribuye un volumen conocido de muestra, por lo que esta técnica sirve para conocer el número de microorganismos viables.
PREPARACION DEL MEDIO
Agregar a la caja de Petri el medio adecuado (plaquear), esterilizado y enfriado a 45°- 50°C. Se saca el tapón de algodón, flamea la boca de tubo y vuelca rápidamente en una caja de Petri estéril apenas abierta, dando un leve movimiento circular para que se distribuya por toda la superficie y se deja solidificar.
Se utilizan series de 3 o 5 tubos y por lo menos 3 diluciones consecutivas en medio liquido. En este caso la cantidad de microrganismos se expresa como un NMP (Numero mas probable) por g o ml.
Se realiza cuando es necesario aumentar el numero de microorganismos que se desean aislar e inhibir a la microbiota acompañante, con el objetivo de elevar la posibilidad de aislarlo.
Su finalidad es incrementar el numero de un determinado microorganismo. Se realiza para revitalizar los microorganismos lesionados, incrementar su vitalidad y adquirir condiciones fisiológicas adecuadas para su correcto desarrollo.
