El diagnóstico viral por el laboratorio

Es aislamiento viral de una muestra adecuada

Si esta muestra es baja se pierde la posibilidad de infectar las células vivas

Se da en cultivos celulares y condiciones de completa esterilidad

Consideraciones de la toma de muestra del paciente

Nombre del paciente

Lugar de procedencia

Tipo de muestra

Fecha y hora

Historia clínica

Factores de la muestra

Tiempo de transporte de la muestra

Temperatura

Medio de preservación

Consideraciones de la muestra

No dejarlo al medio ambiente o en incubadora

No se recomienda congelar y descongelar las muestras (alteran la estructura viral)

Si se guarda en una nevera entre 4 a 8ºC

Si el proceso dura 4 días, se congelan a -70ºC

Se puede utilizar algunos criopreservantes (dimetil sulfóxido, suero, leche descremada, proteínas, sacarías, glicerol y sorbitol)

Técnicas directas para la demostración viral

Visualización de la partícula viral

Microscopía de luz; se efectúa mediante tinciones especiales (coloraciones)

Microscopía electrónica; se visualiza la partícula viral gracias a la resolución del microscopio

Aislamiento viral en cultivo

Es una buena técnica para diagnóstico de infecciones virales asintomáticas

Cultivos primarios

Tienen varios tipos de células

Son de crecimiento limitado in vitro

Resisten 5 a 10 subcultivos

Cepas de células diploides

Derivan de tejidos normales

Se usan en la producción de vacunas

Líneas celulares

Son células inmortalizadas en laboratorio

Resisten "n" nùmero de pases

Derivan de tejidos normales y tumores malignos

Pruebas para la demostración directa del antígeno

Facilita descubrir antígenos virales que se encuentran en los tejidos del huésped

Aglutinación de látex

Son esfera de poliestireno que se une a las moléculas de IgG o IgM

Inmunofluorescencia directa

La demostración de antígeno se realiza mediante la utilización de un anticuerpo marcado con un fluorocromo

Esta técnica es específica para cada antígeno que se desea descubrir

Inmunoensayos; ensayos de captura de antígeno (sandwich), inmunocromatografía

Mediante el uso del suero se trata de demostrar la relación antígeno-anticuerpo

Técnicas de diagnóstico molecular

Ensayos de hibridización

Se usa para confirmar la identificación de un virus en cultivo o descubrirlo directamente desde una muestra

Técnicas para la amplificación del ácido nucleico

Reacción en cadena de la polimerasa

Se pueden encontrar cantidades mínimas de un agente infeccioso

Pasos

La desnaturalización del ADN en la muestra, lo que se logra al someterlo a 95ºC para lograr separar las cadenas

La hibridización de los cebadores (a 55ºC)

La extensión de estos cebadores por la enzima ADN polimerasa (72ºC)

Reacción en cadena de la lipasa o LCR

Su empleo es para el diagnóstico (mycobacterium tuberculosis, borrelia burgdorferi, neisseria gonorrohoeae y N. meningitidis)

Sistema QB replicasa

La replicasa replica el ARN del bacteriófago

ADN ramificado (branched) o bADN

Es un sistema de amplificación, donde se amplifica es la señal en lugar del blanco de ácido nucleico, esto se realiza mediante pasos sucesivos de hibridización

Ensayo de transcriptas reversa

Prueba aplicada a los retrovirus

Técnicas indirectas para el descubrimiento viral

La reacción se da entre antígeno-anticuerpo

a) Los que dependen de la capacidad del anticuerpo que se une al antígeno para ejercer alguna función no relacionada con el virus

b) Los que miden la capacidad de los anticuerpos para bloquear la función viral específica

c) Los que miden directamente la interacción antígeno-anticuerpo

Es importante conocer la etiología viral ya que determina un cambio de conducta clínico

El laboratorio es de gran ayuda para conocer su etiología

Un diagnóstico adecuado permite conocer la epidemiología y tomar medidas adecuadas de prevención

Este diagnóstico puede darse

De forma directa

Son virus que pueden encontrarse presentes en los tejidos o fluidos humanos

De forma indirecta

Demuestran un contacto del huésped con el agente viral

Estas pruebas debe acompañarse de un óptimo nivel técnico para una adecuada recolección y almacenamiento de la muestra

Esto nos ayudará a brindar una interpretación adecuada

La demostración directa de antígenos ayuda al diagnóstico, pronóstico y seguimiento de la infección para un adecuado tratamiento

Son importantes para razones clínicas (epidemiológicas)

Para obtener una prueba de susceptibilidad primero es necesario un aislamiento viral

Depende de varios factores: tipo de prueba, línea celular, laboratorio, etc