Enzymes

- On a commencé par filtrer une suspension de levure sauvages à 100 g/L bien oxygéné.- On a préparer 5 tubes à essais numérotés de 0 à 4. - On a remplis les 4 premiers avec 3mL de substrat, et le dernier avec 3mL d'eau distillée. - On a ajouté dans les tubes: • n°0 -> 3mL d'eau distillé • n°1 -> 3mL de maltose • n°2 -> 3mL de lactose • n°3 -> 3mL de saccharose • n°4 -> 3mL de glucose (tube témoin).- On a testé la présence de glucose à t=0 à l'aide de bandelette de glucotest puis on a placé les tubes dans un bain marie et on a retesté la présence à t=10 min.

Les différents acides aminés du site actif ont été colorés de différentes couleurs , le substrat se situe au milieu mais n'est pas coloré.Le bleu clair correspond à l'acide 156.Le rouge correspond à l'acide 157.Le vert foncé correspond à l'acide 159.Le jaune pâle à l'acide 209.Le rose à l'acide 210.Le gris clair à l'acide 211.Le vert clair à l'acide 214.L'orange à l'acide 353.Le bleu foncé à l'acide 357.Le violet à l'acide 388Le jaune à l'acide 511.Le blanc à l'acide 514.Le gris foncé à l'acide 518.

Les différents acides aminés du site actif ont été colorés de différentes couleurs et le substrat situé au milieu est coloré en mauve.Le rouge correspond à l'acide 171.Le bleu clair correspond à l'acide 201.Le vert clair à l'acide 202.Le jaune à l'acide 205.Le vert foncé à l'acide 239.Le bleu foncé à l'acide 258.Le gris à l'acide 263.Le blanc à l'acide 360.Le rose à l'acide 365.L'orange à l'acide 395.

Plus la concentration en enzyme est importante, plus la dégradation d'amidon en glucose est rapide.Lors de notre expérience, nous avons mesuré l'absorbance en fonction de la concentration d'enzyme rajoutée au substrat plusieurs fois en faisant varier la concentration d'enzymes ajoutées. L'allure de la courbe (voir ci-dessous) traduit la vitesse à laquelle le substrat est dégradé. On remarque que plus la concentration en enzyme augmente plus la dégradation d'amidon en glucose est rapide.

La vitesse de la réaction enzymatique dépend de la concentration de substrat. Lors de notre expérience, nous avons préparé plusieurs solutions avec des concentration d'amidon différentes. Dans chacune d'entre elles on y a ajouté de l'eau iodée et de la solution enzymatique.Nous avons obtenues plusieurs courbes, où on peut remarquer que plus la concentration de substrat augmente, plus la vitesse augmente, jusqu'à atteindre une vitesse maximale.

Grace à ce graphique, nous pouvons voir que pour augmenter la vitesse initiale de la réaction il faut donc augmenter la concentration en enzymes.

Vitesse initiale en fonction de la concentration en substrat Sur le logiciel enzyme, lorsque nous avons augmenté les quantités de substrat , on remarque que la quantité de produits formés par unité de temps est importante. Ainsi la vitesse augmente jusqu'à atteindre une valeur limite appelée Vmax.

Un des principaux facteurs influant sur la vitesse de réaction enzymatique est la température. Pour voir cela, nous avons réalisé une expérience visant à observer l'action enzymatique selon différentes températures. Lorsque la couleur de la solution est sombre, il n'y a pas eu ou très peu de réactions pendant l'expérience. A contrario, plus la couleur est claire, plus la réaction est avancée.

En définitive, dans le cas 3, on constate que l'action enzymatique a été rapide et importante. On en déduit une température optimale d'action, soit 37°C ici. Dans les trois autres cas, la température étant trop basse ou trop élevée, l'action enzymatique n'a pas lieu.