TIPOS DE ASA

Función

Sirve para tomar el inoculo de una suspensión microbiana (medio liquido) o una porción de colonia (medio solido), para ser sembrado en otro medio de cultivo, bien sea una prueba bioquímica o un medio mas enriquecido o selectivo, según sea el caso.

Función

Esta asa como su nombre lo indica esta calibrada para tomar una cantidad especifica de suspensión microbiana. Se usa cuando es necesario que el inoculo cumpla con lo estandarizado en la técnica.

Función

Se usa para inocular ciertas pruebas bioquímicas, especialmente aquellas que requieren ser sembradas por la técnica de punción.

Es un instrumento de laboratorio tipo pinza que se emplea para arrastrar o trasvasar inóculos (pequeño volumen que contiene microrganismos en suspensión) desde una solución llamada "solución madre" al medio de cultivo.

Función

Función

Su función mas frecuente es para hacer repiques de cultivos de hongos, especialmente mohos.

Función

Su función es tomar colonias muy pequeñas presentes en cultivos polimicrobianos, con el fin de poder subcultivarlas.

CAJAS DE PETRI

USO

Sus usos comunes son:

Es utilizado para cultivar bacterias y otros microorganismos.

Se utiliza para observar diferentes tipos de muestras tanto biológicas como químicas. Estas muestras se encuentran encerradas dentro de la placa.

También se emplea para masar sólidos en una balanza.

DEFINICIÓN

Es un instrumento de laboratorio que consta de un recipiente redondo de tamaño practico para aislar bacterias aunque no de manera hermética. Fue diseñada en 1877 por el bacteriólogo alemán Julius Richard Petri e de ahí el atributo del nombre.

TIPOS DE ACUERDO AL MATERIAL DE FABRICACIÓN

Se clasifican en:

CAJA PETRI DE VIDRIO

CAJA PETRI DE PLASTICO

MÉTODO DE ESTERILIZACIÓN

Se define de acuerdo al tipo:

PLASTICO

El material de plástico desechable ya se suministra estéril y listo para su uso. Las cajas de Petri se introducen en bolsas de plástico selladas y se esterilizan con oxido de etileno o radiaciones.

VIDRIO

Se pueden esterilizar por los métodos:

Calor seco

Por aire caliente

Autoclave (Calor húmedo)

Ebullición

Vapor fluente

Vapor saturado a presión

Se utiliza para realizar incubaciones en anaerobiosis
ya que en su soporte de acero inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de atmósfera libre de oxígeno.

La jarra gaspak es un recipiente para simular el ambienete anaerobio en el que viven muchos microorganismos y por consecuencia permitir el crecimiento de varios de ellos que son nutricionalmente exigentes.

SOBRES

Es el mas sencillo y consiste un un sobre comercial generador de hidrogeno y CO2 que es activado por agua o la humedad de las placas de agar

EXTRACCION

En la jarra a través de la generación de vacío , sustituyendo el mismo por otro gas libre de O2 como el nitrógeno

1.- Tapadera

2.- Goma

3.- Soporte del catalizador

4.-Catalizador

5.- Sobre de Gaspak

6.- Indicador de Anaerobiosis

7.- Placas de petri sembradas

VÍA HÚMEDA

Por esta vía se pueden esterilizar materiales metálicos, contenedores quirúrgicos, instrumental de curas, textil como gasas, ropa de quirófano o vendas; gomas, objetos de vidrio como pipetas y biberones, y plásticos.

VÍA SECA

Incineración

Es una forma efectiva de esterilizar el material contaminado a descartar tales como bolsas, papel, uniformes desechables, cadáveres de animales, etc.

Llama directa

En microbiología se utiliza para esterilizar el asa con el mechero

Aire caliente

En medicina aplica a la esterilización de instrumentos quirúrgicos

VÍA HÚMEDA

Definición

Es el método de referencia, utiliza calor húmedo en equipos que se denominan autoclaves.

Autoclave

Es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua a fin de desinfectar materiales e instrumentos quirúrgicos.

Condiciones

Temperatura

Vapor variando hasta mas de 120ºC

Tiempo

De 15- 20 min. de esterilización

Presión

Varia hasta 103kPa por encima de la presión atmosférica

VÍA SECA

Definición

La esterilización por vía seca o calor seco es una variante del autoclave en la que no se usa vapor, al ser menos agresivo (en ausencia de agua el calor se transfiere peor al material) se utiliza a más alta temperatura y durante más tiempo.

Se subdivide en:

Llama directa

Consiste en colocar el material directamente al fuego hasta que éste se ponga al
rojo vivo. De esta forma se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas.
Su eficacia depende de la calidad de la llama.

CONDICIONES

Consiste en colocar el material directamente al fuego hasta que éste se ponga al
rojo vivo. De esta forma se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas.
Su eficacia depende de la calidad de la llama.

Aire caliente

El material se coloca en un horno especial y se somete a altas temperaturas, es un método rápido, económico y no deja residuos

CONDICIONES

temperatura

160ºC

tiempo

2 Horas

Incineración

El material a esterilizar se coloca en cámaras especiales que alcanzan elevadas
temperaturas. Con este método se queman los contaminantes hasta reducirlos a
cenizas.

CONDICIONES

El material a esterilizar se coloca en cámaras especiales que alcanzan elevadas
temperaturas. Con este método se queman los contaminantes hasta reducirlos a
cenizas.

VÍA HÚMEDA

Objetos de acero inoxidable

Vidrio

Plásticos como: PP, PMP, PFA

VÍA SECA

Objetos metálicos

Vidrio

Plásticos como el PFA

MEDIOS LÍQUIDOS

Ejemplos:

Agua peptonada

Caldo común

Caldo Saboureaud

Caldo Cerebro Corazón

Composición

Se compone de:

Alta calidad nutritiva ( Sangre, Leche, Huevo, etc.)

Contienen nutrientes a los cuales se les adicionan sustancias con la capacidad de mantener estables un pH, entre ellos podemos encontrar el caldo nutritivo y caldo peptona.

Definición

Son medios de cultivo representados en este estado también llamados "caldos"

Uso

Homogenizar mezclas

Enriquecer cultivos

Rehidratar cepas liofilizadas

diluciones

MEDIOS SÓLIDOS

Ejemplos:

Agar Común

Agar Cerebro Corazón

Agar SS

Composición

Se compone de:

Se obtienen agregando agar (sustancia de tipo polisacárido que se obtiene de algas marinas) a un medio liquido determinado. Al tener un medio sólido, nos facilita obtener colonias bacterianas aisladas.

Definición

Son medios de cultivo hechos en base a medios liquidos agregandole un geltificante de los cuales los as utilizados son la gelatina y el agar

Uso

Para el estudio de la morfología de las colonias.

Obtener bacterias aisladas sobre la superficie de los cultivos.

Para separar microorganismos

Favorecer el desarrollo de colonias aisladas

MEDIOS SEMISÓLIDOS

Ejemplos:

Agar de Hugh-Leiffson

Agar MIO

Agar SIM

Composición

Se compone de:

Similares a los medios sólidos, la única diferencia es que a estos se les disminuye la cantidad de agar, lo que permite conservar cepas bacterianas y la observación y registro de bacterias móviles.

Definición

Es un medio de cultivo hecho con las características del medio solido pero con una cantidad menor de geltificante

Uso

Para determinar la movilidad de los microorganismos microaerófilos.

Se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias

MEDIOS COMUNES

Función

Son aquellos que poseen componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesitan requerimientos especiales.

Definición

Es un medio de cultivo frecuentemente usado para mantener colonias microbianas.

Ejemplos:

Agar nutritivo

Agar chapman

Agar C.L.E.D

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

Función

Se utiliza para conseguir que proliferen la máxima variedad de microorganismos posibles

Definición

Son aquellos que además de tener sustancias nutritivas normales incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.

Ejemplos:

Agar cuenta estándar (cuenta en placa)

Agar nutritivo (AN)

Agar Soya Tripticaseína (TSA)

Agar sangre (AS)

MEDIOS SELECTIVOS

Función

Favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana

Definición

Tipo de medio de cultivo con algunos elementos o nutrientes específicos

Ejemplos:

Agar cetrimida (Pseudomonas)

Agar Bacillus cereus

•Caldo bilis verde brillante (coliformes totales)

MEDIOS INHIBIDORES

Función

Impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana

Definición

Variable mas restrictiva de los medios selectivos

Ejemplos:

Agar McConkey.

Agar chocolate.

Agar Sabouraud

MEDIOS DIFERENCIALES

Función

Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros y especies

Definición

Medio donde se permite identificar y/o diferenciar (como su nombre indica) una especie de otra, ambas en el mismo medio.

Ejemplos:

Agar DNAsa

Agar almidón

Agar cromogénico para Candida

MEDIOS DE IDENTIFICACIÓN

Función

Identificar características de microorganismos para identificarlos.

Definición

Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.

Ejemplos:

C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -)

agar sangre (tipo de hemólisis)

SS (que es doblemente diferencial),

MEDIOS DE MULTIPLICACIÓN

Función

Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado

Definición

Es un medio de cultivo que promueve la multiplicación de un organismos y que promueve su crecimiento.

Ejemplos:

El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI),

MEDIOS DE CONSERVACIÓN

Función

Se utiliza para aislar y conservar cepas, que por distintas razones nos interese mantener.

Definición

Es un medio de cultivo para resguardar cualquier cepa de diferentes maneras.

Ejemplos:

Medio sólido en caja a 4ºC (hasta 1 semana).

Medio de agar inclinado 4ºC (hasta 2
semanas) con sello de glicerol estéril a 4ºC
(varios meses dependiendo del
microorganismo).

Medio fluido de tioglicolato con carne molida
con sello de aceite mineral estéril a
temperatura ambiente (varios meses
dependiendo del microorganismo).

MEDIOS DE TRANSPORTE

Función

Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente

Definición

Tipo de medio utilizado como almacenamiento temporal a especímenes transportados.

Ejemplos

Medio Amies

Medio de Stuart

CLASIFICACIÓN DE CULTIVOS POR SU COMPOSICIÓN

Se organizan en:

AGAR NUTRITIVO

Definición

El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria.

Composición

0,5% de peptona

0,3% de extracto de carne/extracto de levadura

1,5% de agar

0,5% de cloruro de sodio

agua destilada

pH casi neutro (6,8) a 25 °C

Uso

Se usa para el crecimiento rutinario de varias bacterias ya que en este caldo crecen en la superficie por lo que es mas fácil observarlas.

AGAR BILIS VERDE BRILLANTE

Definición

Es un medio selectivo y diferencial para la determinación de la densidad relativa de bacterias coliformes en agua, residuos y alimentos.

Composición

Se compone de:

Uso

Se utiliza para evaluar el grado de contaminación de las muestras de agua, diversos alimentos y otros productos

AGAR SANGRE

Definición

Es un agar base (Agar nutritivo) con factores de enriquecimiento

Composición

Se compone de:

Infusión de Corazón (a partir de 375 g)

Peptona de Carne

Sodio Cloruro

Agar Agar

Uso

Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de prácticamente todos los microorganismos que pudieran estar presentes

AGAR CHOCOLATE

Definición

Agar Chocolate (CHOC) es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una variante del agar sangre. El agar se llama así debido a su parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.

Composición

Se compone de:

Hidrolizado pancreático de caseína

Peptona de carne

Fosfato dipotásico

Almidón de maíz

Cloruro de sodio

Ágar Base

pH 7,3 ±0,2 a 25ºC

Hemoglobina

H2O ultra purificada

Uso

Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae.

Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y hemina, componentes que podemos encontrar dentro de los glóbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico para el crecimiento es la lisis de los glóbulos rojos.

AGAR MC CONKEY

Definición

El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa.

Composición

Se compone de:

Sales biliares

Colorante cristal violeta

Indicador rojo neutro

Lactosa

Peptona

Cloruro sódico

Uso

Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).

OBJETIVO

Elaborar medios de cultivo de acuerdo a procesos, precauciones, y material adecuado además del correcto uso de estos dentro del laboratorio.

MATERIAL

Probeta graduada

Matraz erlenmeyer

Vaso de precipitado

Mechero

Cajas de petri

PRECAUCIONES

Medidas de seguridad

Uso de guantes

Uso de gafas de seguridad

Desinfección del área de trabajo

Uso debata cerrada

Lavado de manos

REACTIVOS

AGAR

45 g de agar biggy por cada 100ml

DISOLVENTE

Agua destilada

APARATOS E INSTRUMENTOS

Balanza Analítica o Granataria

Autoclave

Mechero

Soporte

PROCEDIMIENTO

1.- Desinfectar el área donde se va a trabajar

2.- Lavarse las manos

3.- Pesar 45g de agar biggy

4.- Medir 100 ml de disolvente en la probeta graduada

5.- Vaciamos las sustancias en un matraz Erlenmeyer y agitar hasta homogeneizar la mezcla

6.- Esperamos a que el medio de cultivo se enfrie de maner aque no haya riego al tocar el recipiente

7.- Vaciar el medio en la placas muy cerca del mechero encendido para evitar la contaminación en el medio de cultivo.

8.- El medio solificara y estará listo para la siembra de microorganismos

RESULTADO

MEDIO DE CULTIVO SOLIDO