Tecnica histologica
Se denomina al conjunto de procedimientos aplicados a un material biologico con a finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones optimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfologicos a traves de los microscopios.
Procedimientos.
Inmediato o vitales
Permiten la observacion y el estudio de protozoarios, celulas sanguineas, celulas descamadas o disociadas, celulas en cultivo o tejido.
Estructurs muy delgadas y translucidas como: membrana peritoneal de animlaes, epidermis de vegetales, granos de polen
Se suelen emplear una serie de microinstrumentos que facilitan la introduccion, al interior de las celulas como: microinyectores, micropipetas microelectrodos o rayos laser.
Coloracion vital
Coloracion intravital
Se administran colorantes vitales a traves de vias digestivas o intratraqueal
Las soluciones de uso mas frecuente son:
Tinta china, carmin de litio, azul tripan (particulas colorantes que demuestren la capacidad fagocitica.
Coloracion supravital
Procedimiento en el cual se aplican a celulas o tejidos provenintes de organismos vivos.
Se deuestran: Mitocondrias con Verde de Jano.
Granulos de las celulas cebadas con: Rojo Neutro
Sustancias granulofilamentosas con azul brillante de cresyl.
Ramificaciones nerviosas con: Azul de Metileno.
ADN y el ARN de las celulas con: Naranja de acridina.
Mediatos o positivales
1. Toma de muestra
Mediante la biopsia
Consiste en la toma de un fragmento de tejido u organo de un ser vivo
Medinate la necropsia
La muestra se obtiene de seres muertos. Es recomendable que tejidos y organos se obtengas inmediatamente despues de la muerte.
2. Fijacion
Detener la vida de las celulas e impedir modificaciones post morten que pueda sufrir la celula.
Esto se consigue inmovilizando las moleculas proteicas e inhibiendo principalmente las enzmaticas haciendolas solubles.
Oxidantes: tetraoxido de osmio, bicromato de potasio, acido cromico, bicloruro de mercurio.
Reductore: formaldehido, glutaraldehido, alcohol etilico, alcohol metilico.
Silvia Lizbeth Díaz Torres
Grupo: 2402
3. Inclusion
Los tejido fijados adquieren cierta consistencia y dureza, pero no la suficiente para que, de ellos, se obtengan secciones delgadas.
Las sustancias de inclusion tienen la propiedad de incorporarse e infiltrarse al interior de las celulas y tejidos con la finalidad de servirles de soporte.
Algunas sustancias de inclusion que se han empleado o se utilizan actualmente. y pueden ser:
Solubles en agua
Gelatina, carbowax, glicol metacrilato.
Solubles en solventes organicos
Parafina, celidina, resinas epoxicas.
5. Microtomia
En esta etapa, los tejidos y la parafina integran un solo bloque que, posee la dureza y la consistencia suficientes para obtener secciones delgadas y transparentes.
Las secciones delgadas o "cortes" se obtienen utilizando instrumentos mecanicos diseñados para que en forma automatica, seccione el bloque de parafina en cortes delgados.
El sistema de funcionamiento de los microtomos consta de cuatro mecanismo principales
1. Sujecion del bloque de parafina
3. El que permite que el filo de la navaja seccione el bloque en cortes delgados y de grosor uniforme
4. El avance del bloque en un numero determinado de micrometros despues que se ha obtenido un corte
2. Sujecion de la navaja
4. Coloracion o tinción
Consiste en que una estructura celular o tisular adquiere especificamente un color bajo la accion de una sustancia colorante.
El proporcionar color a las estructuras se hace con la finalidad de distinguirlas entre si.
Colorantes naturales
Animales
Carmin, en tecnica histologica se utiliza carmin de Best para demostrar glucogeno.
Carmin de Mayer: para demostrar mucina
Vegetales
Hematoxilina: obtenida de corteza de arbol.
Sarafina: que se extrae de una lilicea.
Oeceina: que se obtiene de un liquen
Colorantes artificiales o sinteticos
Son productos derivados de la destilacion de la hulla o carbon. Genericamente se les conoce como colorantes derivados del anilina.
Clasificacion de coloracion.
Coloracion directa o sustantiva
Coloracion indirecta o adjetiva
Coloracion Progresiva
Coloracion regresiva
Coloracion simple
Coloracion compuesta o combinada
Coloracion ortocromatica
Coloracion metacromatica
Coloracion pancromatica
6. Montaje
Concluido el proceso de tincion de los cortes, estos se deben colocar en condiciones de proteccion y de poderlos utilizar infinidad de veces sin que se deterioren
Este procedimiento consiste en colocar encima del corte coloreado y diafanizado una gota de sustancia adherente, diluida, generalmente Xilol, y encima una laminilla de cubreobjetos
Al conjunto de procedimiento se les conoce como: impregnaciones metálicas.