CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN
1. Fundamento del método
Principios de la HPLC
Se emplea para la separación y análisis de los componentes químicos de una mezcla.
Se caracteriza por una fase móvil y una estacionaria y la muestra de interés.
Los componentes con mayor afinidad se desplazarán con menor velocidad, que aquellos que presentan menor afinidad.
Capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, de alto peso molecular.
La fase móvil es líquida
lleva la muestra a través de la fase estacionaria
Ventajas
Amplio rango de aplicabilidad
Debido a la alta disponibilidad de equipos columnas
Alta precisión en sus resultados (±0.5 % o menor)
Fácil manipulación de los gradientes generados en la fase móvil
No es destructiva
Los compuestos separados en la columna pueden ser recolectados
Tiempo de separación menor a 30 min por muestra analizada
Alto poder de separación con detección sensible
La operación es flexible, personalizable y automatizada
No está restringida por la volatilidad o estabilidad térmica de la muestra
Equipo
1.Sistema de tratamiento de solventes
2.Sistema de bombeo
3. Sistema de inyección de la muestra
4. Columna
5. Detectores
6. Sistema de recolección de datos
7. Cromatograma
FASE MÓVIL
Una mezcla de sustancias polares y no polares
Varían en concentración dependiendo de la muestra que se quiere analizar
Métodos en los que se puede operar
Fase reversa
Analiza muestras que contienen sustancias neutrales o no ionizadas
Solubles, en mezclas de compuestos orgánicos y agua
Par ion
Es empleado especialmente en bases y cationes
Fase normal
Separa los analitos con base en su polaridad.
Tipos de HPLC
Absorción
Exclusión molecular
Afinidad
Intercambio iónico
Conclusiones y recomendaciones
Conclusiones
La cromatografía liquida de alta resolución
es uno de los métodos mas preciosos ya que
su rango de error es mínimo permitiendo así
que no sea destructiva y rápida. Por lo que es
utilizados en analitos farmacéuticos y
alimenticios.
Recomendaciones
Es recomendable utilizar los detectores de índice de refracción.
los detectores electroquímicos es recomendable emplearlos cuando se estudian analitos con propiedades oxidantes o reductoras
Es recomendable que se utilicen materiales de calibración y de control comerciales
¿Qué analitos y en qué muestras se aplica el método elegido?
Analitos
Especies iónicas
Productos naturales lábiles
Componentes poliméricos
Diversidad de grupos polifuncionales
de alto peso molecular
Aminoácidos
Proteínas
Ácidos nucleicos
Terpenoides
Plaguicidas
Antibióticos
Esteroides
Carbohidratos
Fármacos
Hidrocarburos
Especies organometálicas
Muestras de aplicación
Analito 1
Aminas aromáticas heterocíclicas
Elaboración de alimentos
Analito 2
Cantidad de conservante
(benzoatos de sodio y potasio)
Analito 3
Clorhidrato de cetirizina en cápsulas
Analito 4
Componentes agregados a los jarabes
Analito 5
Principio activo en una dosis de pregabalina