kysyntä siirtogeenisestä eliöstä
geenikirjastosta etsitään sopiva geeni
valitaan geenikirjastosta bakteeri-/hiivaviljelmä
tunnetulla eliöllä on haluttu geeni ja geenin emäsjärjestys tunnetaan
solun genomi eristetään ja puhdistetaan
geeni monistetaan bakteeri-/hiivaviljelmän avulla
käänteiskopioijaentsyymin avulla valmistetun vastin-DNA:n avulla myös ei-bakteerisoluja voidaan monistaa bakteeriviljelmissä
geeni voi olla plasmidissa tai hiivalla tumassa tai jopa keinotekoisena krosomina
restriktioentsyymien avulla leikataan haluttu geeni genomista
elektroforeesin avulla erotellaan DNA-pätkät toisistaan
valitaan haluttu DNA-pätkä
monistaminen mahdollisesti PCR:n tai bakteeri-/hiivaviljelmän avulla
DNA-pätkä(usein plasmidi) katkaistaan samoilla restriktioentsyymeillä kuin alkuperäinen geeni katkaistaan Geeni liitetään DNA-pätkään ligaasientsyymin avulla.
DNA-pätkän yhteyteen liitetään sopiva säätelyalue sekä geeni, joka myöhemmin ilmentää, onko geenin siirto onnistunut (antibioottiresistenssigeeni, resistenssigeeni torjunta-aineelle, merkkigeeni, kuten hohtamista aiheuttava geeni, yms.)
siirretäänkö geeni kehittyneeseen yksilöön(tai alkeellinen yksilö) vai uuteen yksilöön?
geeni siirretään haluttuun soluun vektorin avulla
geeniterapia toimii samalla tekniikalla
plasmidi
liposomi
agrobakteeri
geenipyssy
sähköimpulssi
geeni vain osassa soluja
ei periydy ellei liity ituradan soluihin
munasolu ja siittiö ovat yhtyneet, mutta tumat ovat erillään(ei ole kyse tsygootista)
siirretään useita kappaleita geenistä mikroinjektion avulla toiseen näistä tumista
geeni voi siirtyä nolla, yksi tai monta kertaa solun tai solujen genomiin
useamman kokeilun jälkeen saadaan lopulta haluttu siirtogeeninen eliö
sopiva yksilö huomataan geenin yhteyteen liitetystä geenistä(kuten merkkigeeni) TAI koettimella/DNA-sirun avulla
siirtogeeninen yksilö on valmistettu
myöhemmin geeni kaikissa soluissa
periytyy
säätelyalue voidaan valita niin, että geeni toimii vain tietyssä halutussa solutyypissä
PCR:n ja sopivien alukeiden avulla saadaan geeni monistettua
kun sopivat alukkeet, saadaan monistetua juuri haluttu geeni
virus
KYSYMYS: tuleeko ennen elektroforeesia monistus?
eristys, puhdistus
monistus
elektroforeesi
monistus
siirto soluun