TÈCNIQUES D’IMMUNODIAGNÒSTIC
Immunoassaig
Complex anticòs-antigen
Tècniques indirectes o secundàries
Aglutinació
Es la formació d'agregats Ac-Ag
L’Ag es denomina aglutinogen.
El Ac es denomina aglutinina.
Pot visualitzar-se a simple vista o amb microscopi.
Més sensible per detectar petites quantitats d'Ac, que les reaccions de precipitació.
Directe
l’aglutinogen es troba sobre la superfície d’una cèl·lula.
DCT
Busca que Ac que puguin fixar-se als glòbuls vermells i causar l'hemòlisis.
Suspensió de bacteris, protozous, espores i hematies
Acs incomplets
Sensibilitza el seu Ag sense aglutinar-lo
Indirecte
Els aglutinògens estan enganxats a esferes de làtex o a cèl·lules vitals.
Consisteix en el recobriment de aglutinogen sobre les partícules per unir-los a l'Ac
Hemaglutinació indirecta passiva
Hematies amb la substància que es vol estudiar
Al posar-el en presència d’Ac preparats contra aquella substància, es produirà aglutinació.
Quan l'Ac s’uneix a la substància i no als glòbuls vermells no és produeix aglutinació.
Aglutinación +: indica absència de la substància.
Aglutinación -: indica presència de la substància
Tipus
Valoració
Alt grau sensibilitat i gran quantitat Ag que es pot detectar
Difícil determinar quantitativament la concentració de la subs investigada.
Es fan dilucions seriades de mostres problemes amb una concentració
decreixent.
Concentracció = Títol x UMD
Precipitació
Complexe Ag-Ac en forma de xarxa insoluble.
Medi líquid
mesura la terbolesa que produeix la precipitació d’immunocomplexes.
proteïnes de fase aguda
factors del complement
Presencia d'Ac
altres proteïnes sèriques
Tipus
Immunonefelometria
Petites concentracions de partícules disperses.
Mesura llum dispersada en direcció diferent a la llum emesa amb el Nefelòmetre.
més exacte per la mesura de l’opacitat.
Turbidimetria
Mesura de la llum transmesa a través d’una suspensió.
Grans concentracions de partícules
disperses.
Permet valoració quantitativa sense separar el producte de la solució amb espectrofotòmetre.
Medi semisòlid
Disfusió de macromolècules en gel.
En zona de equivalència es formen immunocomplexes que precipiten.
Linies
Arcs
Halos
Bandes
La velocitat
Concentracció del gel.
Concentració de Ag i Ac.
Pes molecula de Ag i Ac.
Temperatura
Tècnica de difusió radial doble de Ouchternoly
L'Ag-Ac es difonen de manera radial, creant un arc de precipitació.
Prop del pou amb menys concentració o PM superior.
Es podrà saber aproximadament la concentració de la substància problema.
Sembrant en pouets l'Ag i l'Ac en un gel d'agarosa.
Estudi d'indentitat Ag
Determinar l’existència o no de
determinants comuns entre Ags
RID
Quantificació d'Ag
Sembrant un Ag o Ac en un pouet de gel d'agarosa amb el component complementari al sembrat.
Apareix un anell de precipitació degut a la difusió.
L'àrea té relació amb la concentració component que difon pel gel.
Apareix en la zona de equivalència
Forma un gradient de concentració.
Procediment
Preparar agar amb un dels components.
Posar estàndards i mostres
Col·locar en càmara humita i permetre la difusió.
Visualitzar els anells i mesurar els diàmetres.
Realitzar una corba de treball i calcular concentración.
Fixació del complement
Sistema del complement
Proteïnes plasmàtiques.
Comporta la lisis de les membranes cel·lular del eritròcits.
Mesurar el nivells d'anticossos en sèrum.
Procediment
Incubar el sèrum problema amb l’antigen i
el complement.
Afegir un sistema indicador (eritròcits amb hemolisines).
Interpretar resultats
Lisis eritròcits.
Sedimentació dels eritròcits.
Tècniques directes o primàries
Es necessita presencia d'un marcador
Requisits de formació
Ac i Ag multivalents
Concentracions (Punt d'equivalència)
1 molècula d’Ag per 3 o 4 d’Ac
Temperatura
Ac
pH
6-7,5
Concetracció de sals en el medi
més difícil precipitació
Afinitat i avidesa
Càrrega dels immunocomplexos
més difícil precipitació
Diagnòtic de malalties
Estimar el grau de reposta immunològica humoral
Identificació de mol·lècules d'interès mèdic
Es visualitza un canvi físic en el medi
Es poden fer en
Tipus
Tècnica de immunoelectroforesis
Separació per electroforesis amb immunodifusió.
Formació d'anells de precipitació.
Identificació de fraccions proteiques especifiques en una barreja antig``enica.
Detecció de presència d'Acs especifics en una M problema
Determinar la puresa d'un Ag
Procediment
Separar per electroforesis la barreja que volem estudiar.
El component de la barreja es fa reaccionar amb un Ac/Ag específic que es troba al pou del costat.
L'Ag i l'antisèrum difonen un cap l'altre, formant línies pel precipitat.
Donar temps per la difusió de: proteïnes de sèrum i abs en antisèrum.
Tenyir el gel i llegir les linies.