Métodos Diagnósticos em Virologia

Informações gerais

Importância dos métodos diagnósticos

O diagnóstico laboratorial de infecções virais possui aplicações amplas e abrangentes. A pesquisa clínica e epidemiológica de episódios de enfermidade em indivíduos ou em populações, na maioria das vezes, requer a complementação ou confirmação por técnicas laboratoriais. As variações na apresentação clínica das viroses, a ocorrência de síndromes distintas associadas com o mesmo agente patogênico ou, ainda, a fato de manifestações clínicas serem semelhantes, mas produzidas por distintos vírus, fazem dos testes laboratoriais importantes recursos auxiliares ao diagnóstico clínico. O monitoramento constante das zooonoses virais fornecem informações importantes sobre o potencial zoonótico dos vírus e também direciona a elaboração de vacinas e adoção de medidas profiláticas. A comercialização, acima de tudo, a internacional, de animais de interesse econômico geralmente requer a certificação de que esses animais não estejam infectados com vírus latentes ou infecções persistentes.

Pesquisas clínicas e epidemiológicas

Produção de vacinas

Vigilância sanitária

Adoção de medidas profiláticas

Confirmação laboratorial

Comercialização de animais de interesse econômico

Características desejáveis nos métodos diagnósticos

A sensibilidade é a capacidade do método em detectar quantidades pequenas do agente patogênico ou de seus produtos. A um nível populacional, a sensibilidade mede a capacidade de detecção de um número maior ou menor de indivíduos que são realmente positivos. Já a especificidade, trata da capacidade da técnica de identificar um determinado vírus e, simultaneamente, distinguí-lo de outros agentes, ainda que sejam semelhantes. A rapidez é de extrema relevância, já que o resultado determina as medidas a serem adotadas. A repetibilidade ou reprodutibilidade é quando há uma consistência dos resultados obtidos quando da repetição da execução do método. Ele determina a confiabilidade de qualquer teste diagnóstico.

Sensibilidade

Especificidade

Repetibilidade

Simplicidade

Baixo custo

Automaticidade

Rapidez

Praticidade

MÉTODOS INDIRETOS - detectam anticorpos específicos contra o vírus, ou seja, a resposta do hospedeiro contra o agente patogênico; técnicas sorológicas.

SORONEUTRALIZAÇÃO - detecta anticorpos que neutralizam a infectividade do vírus. A presença de anticorpos, previne a produção de efeitos citopáticos pelos vírus.

HEMAGLUTINAÇÃO E INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO -É utilizado para mensurar anticorpos, aptos a reagir com antígenos capazes de induzir a aglutinação de hemácias.Neste método, a presença de anticorpos capazes de inibir a reação de hemaglutinação do patógeno determina sua identificação sorológica, já a inibição é um método que detecta anticorpos capazes de inibir a capacidade hemaglutinante de alguns vírus. A presença da imunoglobulinas impede a sua atividade hemaglutinante, enquanto que a sua ausência leva a aglutinação de hemácias.

ELISA- um dos principais métodos para detecção de anticorpos. Baseia-se na reação antígeno-anticorpo, onde uma das duas moléculas é marcada com uma enzima, esta enzima age sobre um substrato de forma que uma substância cromogênica presente no experimento mude de cor.

IMUNOFLUORESCÊNCIA E IMUNOPEROXIDASE: A imunofluorescência utiliza marcadores como fluoresceína e a rodamina que emitem fluorescência quando visualizados em microscopia de UV.Já a imunoperoxidase utiliza como marcador a enzima peroxidase que origina uma molécula visível ao microscópio óptico.

IMUNOBLOT- (western, dot/slot blot) método de detecção viral, por meio da detecção de anticorpos.

FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO baseia-se no fato de que os anticorpos ao se ligarem aos antígenos específicos promovem a ativação da cascata do complemento, cujos efeitos podem ser observados indicando a presença de anticorpos na amostra teste. A técnica já foi muito utilizada , porém atualmente é utilizada em situações restritas, pois é muito trabalhosa, não automatizável e os resultados são demorados

IMUNODIFUSÃO - método baseado na insolubilização e precipitação do complexo antígeno anticorpo. O complexo é visualizado na forma de linhas hialinas em um gel de agarose.

MÉTODOS DIRETOS - detectam a presença do vírus ou de seus antígenos e ácidos nucléicos.

Técnicas Moleculares

HIBRIDIZAÇÃO (SOUTHERN BLOT/NORTHERN BLOT)- técnica de detecção de ácidos nucléicos por meio de sondas (sequências nucleotídicas complementares às do ácido nucléico do agente alvo da pesquisa) moleculares específicas.

REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE(PCR) - trata-se de uma técnica de amplificação/multiplicação de quantidades mínimas de ácidos nucléicos presentes em uma amostra.

Cultivo Viral

CÉLULA - O material suspeito é inoculado em células cultivadas in vitro e a replicação do vírus é evidenciada pela produção de efeito citopático ou pela detecção de proteínas ou ácidos nucleicos virais nas células infectadas.

OVOS EMBRIONADOS - A aplicação desta forma de diagnóstico é restrita aos vírus de multiplicação embrionária, o processo é feito com 0,1 de inóculo de acordo com tropismo viral.

INOCULAÇÃO EM ANIMAIS - É um diagnostico complementar utilizado em casos específicos por questões éticas.