DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA,
HEMATOCRITO, VSG, CUENTA DE ERITROCITOS
E ÍNDICES ERITROCITARIOS

MÉTODO DE WINTROBE

FUNDAMENTO

Consiste en dejar que la sangre sedimente por la acción de la gravedad formando un paquete más o menos compacto separado del plasma

PROCEDIMIENTO

1. Mezclar bien el tubo que contiene la sangre.

2. Llenar la pipeta Pasteur de sangre, después introducir la punta hasta el fondo del tubo de Wintrobe e ir vistiendo lentamente evitando la formación de burbujas, hasta llegar a la marca de “0”.

3. Colocar el tubo verticalmente en la gradilla (fijarse que este nivelada) durante una hora.

4. Leer la altura de la columna de plasma que aparece en la parte superior, en la escala que va

VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES 0 a 7 mm/hr.

MUJERES 0 a 15 mm/hr.

MÉTODO EN CÁMARA NEWBAWER

FUNDAMENTO

El líquido diluyente de Gower para eritrocitos es isotónico y actúa como fijador para preservar la forma celular.

PROCEDIMIENTO

a) Con la ayuda de la boquilla o el micro pipeteador, se aspira sangre homogeneizada con la pipeta de Thoma para eritrocitos hasta la marca de 0.5

b) Aspirar luego el líquido diluyente de eritrocitos hasta la marca 101.

c) Se debe de evitar la formación de burbujas. Agitar la pipeta suavemente para mezclar o bien mezcle por medio de agitador electrónico si es que cuenta con él.

d) Eliminar de 4-5 gotas de la pipeta y con la siguiente llenar por capilaridad la cámara de Neubauer previamente preparada.

e) Dejarla reposar por dos minutos, colocarla bajo el objetivo seco fuerte (40x) y contar los eritrocitos presentes en los cinco cuadros marcados con la letra E, utilizando el método señalado.

f) Una vez concluido el conteo, lavar la cámara con el agua de la llave, agua destilada y finalmente con alcohol. Secar con un paño limpio, suavemente y utilizar jabón si es necesario

VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES: 5.5 a 6.3 Millones / mm3 o ul

MUJERES: 4.1 a 5.7 Millones / mm3 o ul

EL MÉTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA

FUNDAMENTO.

Para convertir la Hb-O2 en Hb-CN se utiliza el Reactivo de Drabkin, el cual contiene ferricianuro de potasio K3Fe (CN)6 que convierte el Fe++ en Fe+++ convirtiéndose en metahemoglobina. Luego el KCN del mismo reactivo se combina para formar la Cianometahemoglobina, cuyo pico máximo de absorción es de 540nm con un rango de 530 a 550 nm.

PROCEDIMIENTO

1) Se marcan 2 tubos de ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y se colocan 5 ml. del Reactivo de Drabkin en cada uno.

2) Con la pipeta de Shali, se toma 0.02 ml (20l) de sangre limpiando perfectamente la pipeta por fuera con un segmento de papel desechable humedecido con solución salina, se pasan al tubo, lavando la pipeta 2 o 3 veces, por aspiración y expulsión del reactivo dentro de la misma.

3) Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar la mezcla por 5 minutos. Pasar a las celdas.

4) Ajustar el espectrofotómetro a cero de absorbancia con el blanco de reactivo (B) a 540 nm. y se lee la absorbancia del tubo problema.

5) Calcular la concentración de la Hemoglobina, a partir de la Ley de Beer o bien extrapolar en la curva de calibración

CURVA DE CALIBRACIÓN

a) Marca 5 tubos de ensaye de 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10, 15, 20 g/dl

b) Pipetear con precisión, de la solución valorada de Cianometahemoglobina (St) de concentración de 20 g/dl y del Reactivo de Drabkin, en cada uno de los tubos correspondientes y mezclar bien.

c) Medir la absorbancia de cada dilución en el espectrofotómetro a 540 nm, contra el blanco (B).

d) Graficar en papel milimétrico, en las ordenadas (Y) las absorbancias y en las abscisas (X) las concentraciones.

e) Trazar una línea perpendicular que parta del vértice (O) y toque el mayor número de puntos.

f) Extrapola las absorbancias de las muestras problema.

VALORES DE REFERENCIA

A. HOMBRES 15 a 20 g/dl 9.3 a 12.4 mmol/l

B. MUJERES 12.5 a 16.5 g/dl 7.5 a 10.33 mmol/l

MÉTODO DEL MACROHEMATROCRITO

PROCEDIMIENTO

a) Calcule el hematocrito, centrifugando el tubo a 3500 r.p.m. durante 30 minutos. En caso de no contar con esta preparación efectuar el procedimiento .

b) Con una pipeta Pasteur llénese de sangre el tubo Wintrobe hasta la marca de “0” cero.

MÉTODO DEL MICROHEMATOCRITO

PROCEDIMIENTO

a) Llenar con sangre capilar o venosa un tubo capilar aproximadamente tres cuartas partes del total de su longitud.

b) Cierre el extremo del tubo capilar distante de la sangre acercándolo a la flama del mechero y rotándolo, también se puede sellar con plastilina (cerciórese de que el cierre de dicho extremo haya sido completo).

c) Centrifúguese en la centrífuga para microhematocrito durante 5 min.

VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES 46 a 56 %

MUJERES 39 a 50 %

VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO(VCM)

Permite calcular el volumen promedio de los hematíes.

VALORES DE REFERENCIA

entre 85 - 95 f

HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM)

Permite determinar la cantidad de hemoglobina contenida en cada hematíe.

VALORES DE REFERENCIA

entre: 30 -34 pg

CONCENTRACION CORPUSCULAR MEDIA DE HEMOGLOBINA (CCMH)

Expresa la concentración porcentual de hemoglobina en cada hematíe.

VALORES DE REFERENCIA

entre 32 - 34 %.

INDICE DE DISTRIBUCION DE LOS HEMATIES (IDH)

También se denomina anchura de la distribución eritrocitaria o ADE. Es el coeficiente de variación de los glóbulos rojos.

VALORES DE REFERENCIA

igual o inferior al 15%

ANCHURA DE LA DISTRIBUCION DE LA HEMOGLOBINA (ADH)

Es la desviación estándar de las concentraciones de hemoglobina de los hematíes

VALORES DE REFERENCIA

2.2 y 3.2 g/DL