Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en microorganismos gramnegativos

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Codifica una purina

resistencia de alto nivel a penicilina en cepas con mutaciones de penA, penB y mtr

penB

Hiperexpresión de la bomba de expulsión MtrCDE

favorece la resistencia a penicilinas, macrólidos, rifampicina, tetraciclinas y quinolonas, y puede estar también implicada en la disminución de sensibilidad a cefalosporinas.

alteraciones de una porina

resistencia a las tetraciclinas y a una pequena disminución de la sensibilidad a quinolonas.

penA

Codifica PBP1

afectan únicamente a la actividad de las penicilinas

Codifica PBP2

mtr

piQ

ponA

Presenta una betalactamasa plasmídica de tipo TEM-1

múltiples mutaciones cromosómicas

El tratamiento inicial era la penicilina sin embargo, esta cepa fue disminuyendo su sensibilidad progresivamente.

método de difusión con discos no es fiable para el estudio de sensibilidad a betalactámicos

Microdilución en caldo

Método de dilución en agar

Los métodos de elección

Penicilina, cefalosporinas de primera y segunda generación, imipinem y aztreonam

Este fenotipo afecta la sensibilidad

Se han aislado cepas con disminución de la sensibilidad hacia la penincilina

Alteracionesen la PBP2 (codificado por el gen penA). Este fénotipo se denomina PenI

Neisseria meningitidis

Neisseria gonorrhoeae

La sensibilidad se determina

método de dilución en agar, siendo este el método de referencia para la determinación de la CMI,

El antibiograma debe acompanarse de la prueba cromogénica de nitrocefina para detectar la posible producción de betalactamasa.

método de difusión con tiras de gradiente de antibiótico como el Etest es una alternativa aceptable para la determinación de CMI

Resistencia a betalactámicos en Neisseria

Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en microorganismos gramnegativos

Nombres de los integrantes: María Paula Cortes Quiroga - 0402107 Valeria Ruiz - 0401962 Jharob Herreño Tapasco - 0402171 Santiago Mejía Galvis - 0402069 Susana Murillo Escobar - 0402155 Ana Sofía Velandia Robayo - 0402128

Resistencia a quinolonas

Enterobacterias

Resistencia de origen plasmídico

No hay marcadores fenotipicos claros pero se investiga con metodos moleculares y se guia por la sensibilidad al acido nalidíxico

Resistencia por mutaciones

Mutacion en genes de topoisomerasa

Deteccion fenotípica

Sensibilidad disminuida al acido nalidíxico y a ciprofloxacina

Alta probabilidad de presencia de genes qnr y/o de otros genes plasmidicos

Resistencia al acido nalidíxico y sensibilidad intermedia o resistencia a ciprofloxacina

Alta probabilidad de al menos 2 mitaciones en gyrA o gyrA+parC

Resistencia al acido nalidíxico y sensibilidad a ciprofloxacina

Alta probabilidad de mutacion en gyrA

gyrA

parC

Resistencia baja

Alteracion de las porinas

Hiperexpresion de bombas de expulsion activa

MexEF-OprN

MexXY-OprM

MexCD-OprJ

MexAB-OprM

Resistencia a aminoglucosidos

Resistencia genetica

Mutaciones que afectan difusion pasiva a través de membrana externa

Metilacion postranscripcional de RNA ribosomico

Principal mecanismo por inactivacion enzimatica

Nucleotidiltransferasa

Acetiltransferasa

Fosfotransferasa

Deteccion fenotipica

Inactivacion enzimatica

Diametro de inhibicion de netilmicina, gentamicina y tobramicina

Sensibilidad intermedia a la tobramicina posiblemente por presencia de nucleotidiltransferasa (2´´)

Gentamicina resistenteo con disminucion del halo de inhibicion e igual en la tobramicina

Sensibilidad intermedia a gentamicina posiblemente por produccion de acetiltransferasa (3)-I

Halo de inhibicion solo de gentamicina

Sensibilidad intermedia a netilmicina posiblemente por presencia de acetiltransferasa (3)-II y acetiltransferasa (3)-IV

Cepa sensible a amikacina pero intermedia o resistente a tobramicina o netilmicina y sensible a gentamicina

Sensibilidad iytermedia a amikacina posiblemente por produccion de acetiltransferasa (6´)

Antibiograma reducido

Amikacina, gentamicina y tobramicina

Antibiograma completa

Amikacina, estreptomicina, gentamicina, kanamicina, neomicina, netilmicina y tobramicina

Enterobacter spp. y C. freundii

Fallo terapeutico

Si después de 3-4 días de tratamiento antimicrobiano y se aila la misma especie.

Prueba de sensibilidad para ver si aumento la resientecia a beta lactamicos

El CASFM4 recomienda que cuando las pruebas de sensibilidad antimicrobiana indican que el aislado presenta sensibilidad disminuida o resistencia a algunas de las cefalosporinas de tercera generación se informen todas ellas como resistentes

En los aislados en los que se ha detectado la producción de una AmpC plasmídica

Klebsiella spp., S. enterica y P. mirabilis

Deteccion de plasmidos AmpC

Diefencia con BLEE

Cefoxitina

E. coli

método de inducción de AmpC puede resultar útil en la detección de AmpC plasmídica

test en 3D, agar cefoxitina, Etest de cefotetán/cefotetán más cloxacilina

Métodos de sinergia de doble disco (más rentable)

Cefotaxima y ceftazidima

Cloxacilina y ácido fenil.borónico

Clasificaión según la genética

6 familias, que se diferenian por la homologia de sus genes

MOX

Aeromonas caviae

EBC

E. cloacae/ Enterobacter asburiae

FOX

Aeromonas media

ACC

Hafnia alvei

DHA

M. morganii

CIT

C. freundii

Producción

Depende del grado de expresion del gen gen blaAmpC

Sensibilidad

Cefalosporinas de 4° generación y carbapenemicos

Hiperprodcucción

Fenitipo de resistencia AmpC

Penicilinas, asociados a inhibidores de betalactamasas, cefalosporinas de 1° y 2° generación

Inducidos

Mutaciones en genes reguladores de tipo ampD y ampR

E. cloacae, M. morganii, P. aueruginosa

Constitutivos

Ausencia de genes reguladores del tipo ampD o ampR

Fenotipo de resistencia natural o salvaje

Farmacos que:

No lo inhibe

Ácido clavulánico, sulbactam, tazobactam

Inhiben

La cloxacilina, aztreonam, ácido borónico y sus derivados

Su acción

Extendida

AmpC espectro estendido

Afecta cefalosporinas de 4° generacion Prevalencia desconocido)

Hidrolizan

Cerfalosporinas de 1° y 2° generacion (incluido cefamicinas) y en menor medida cefalosporinas de 3° generación.

Carbapenemasas

Información de los resultados y recomendaciones terapéuticas

Betalactamasas tipo AmpC

Aztreonam

VIM, KPC38, CLSI3 y EUCAST

Carbapanémicos en función de los puntos de corte de sensibilidad establecidos

Se ha recomendado también fosfomicina o nitrofurantoina, sobre todo en el caso de las infecciones urinarias.

Como opciones alternativas se ha sugerido la tigecilina y la colistina.

Diferenciación fenotípica de las diferentes carbapenemasas

No es posible utilizar este método.

Resistencia al Aztreonam y no se inhibe con EDTA.

Metalo-bectalactamasas

Falsos positivos de P. aeruginosa con P. baumanii. Por sinergía entre los carpapenémicos y EDTA.

Sensibilidad por el Aztreonam

Detección fenotípica de las carbapenemasas

Medio CHROMagarTM KPC (CHROMagar)

Alta sensibilidad y especificidad para la detección de cepas con enzimas tipo VIM y KPC

Se observa el perfil hidrolítico

Prueba modificada de Hodge

Carbapenemasas tipo A y B, pero no las que tienen OXA-48

Detectar microorganismos productores de B-lactamasas, como BLEES o KPC.

La posible inhibición por los diferentes inhibidores de betalactamasas, la epidemiología local y la identidad del microorganismo en el que se pretende detectar o inferir la producción de estas enzimas.

Es importante verificar que existe un mecanismo de inactivación de los carbapenémicos

Subtopic

Resistencia a los carbapenémicos

Producción de B-lactamasas

Clases moleculares de Ambler

Bush y Jacob

OXA

OXA-23, OXA-24, OXA-58, OXA-143 y OXA-51

Acinetobacter y Enterobacterias. También están presentes en K pneumoniae y E. coli. Eficientes contra cefalosporinas de 3° y 4° Inhibido por ácido clavulanico, sulbactam o tazobactam. Resistentes a la penicilina.

KPC

GES 4

Encontrada en P. aureginosa, Acinetobacter spp y enterobacterias. Eficiente contra cefalosporinas, penicilinas y en su mayoría por carbapenémicos.

Hidrolizan, cefalosporinas, penicilinas y carbapenémicos.

Se ha encontrado en Klebsiella, P. aureginosa, A. baumanii y Enterobacteriae

IMI (IMI-1 y -2) y NMC-A

SME

Aztreonam, cefalosporina de 3° y 4° Son inhibidas por ácido clavulanico.

SPM, GIM, SIM, AIM, DIM y KHM, y NDM-1

metalo-betalactamasas

IMP y VIM

se inhiben por agentes quelantes

Contra todos los antibióticos betalactámicos con la excepción del aztreonam y no se inhiben por el ácido clavulánico, sulbactan o tazobactam

Betalactamasas de espectro extendido (BLEE)

identificacion

cica beta- test

cefalosporinas cromogenica

betalactamas y AMPc hiperproducidas

tecnica de disco

Ac. Clavulanico

cefalosporinas de 3 y 4 gen y monobactamicos

tipos

A (abler)

2ber

CMT, TEM 50

2be de Bush y Jacoby

PER, VEB,BES,GES,TLAySFO

TEM y SVH

causan

cefamicinas (cefoxitina) ni carbapenémicos (imipenem, meropenem y ertapenem), siendo inhibidasporelácidoclavulánico

resistencia o sensibilidad disminuida a penicilinas,oximinocefalosporinas (cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima, cefepima) y monobactámicos (aztreonam)

Betalactamasas resistentes a los inhibidores (IRT, OXA)

existen por mutaciones betalactamasas resistentes a la inhibicion de las betalactamasas (IRT)

Enterobacter cloacae Enterobacter aerogenes Citrobacter freundii Morganella Serratia marcescens Bacilos gramnegativos no fermentadores(P. aeruginosa) Portadores de betalactamasa tipo AmpC inducible

OXA1

TEM mutant

Resistencia a aminopenicilinas, carboxipenicilinas, ureidopenicilinas (en mayor o menor medida) y sensibilidad disminuida o resistencia a amoxicilina-ácido clavulánico Estas cepas muestran además sensibilidad a las cefalosporinas, incluyendo las de primera generación. También se afecta la asociación ampicilina-sulbactam y generalmente suele mantenerse o disminuir levemente la sensibilidad a piperacilina-tazobactam, Estepatrón se puede ver alterado ante la presencia a˜nadida de otros mecanismos de resistencia15.