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PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO DE ACUERDO A LA NORMATIVIVAD

Lo dividimos en:

RESULTADO

MEDIO DE CULTIVO SOLIDO

PROCEDIMIENTO

8.- El medio solificara y estará listo para la siembra de microorganismos

7.- Vaciar el medio en la placas muy cerca del mechero encendido para evitar la contaminación en el medio de cultivo.

6.- Esperamos a que el medio de cultivo se enfrie de maner aque no haya riego al tocar el recipiente

5.- Vaciamos las sustancias en un matraz Erlenmeyer y agitar hasta homogeneizar la mezcla

4.- Medir 100 ml de disolvente en la probeta graduada

3.- Pesar 45g de agar biggy

2.- Lavarse las manos

1.- Desinfectar el área donde se va a trabajar

APARATOS E INSTRUMENTOS

Soporte

Balanza Analítica o Granataria

REACTIVOS

DISOLVENTE

Agua destilada

AGAR

45 g de agar biggy por cada 100ml

PRECAUCIONES

Medidas de seguridad

Lavado de manos

Uso debata cerrada

Desinfección del área de trabajo

Uso de gafas de seguridad

Uso de guantes

MATERIAL

Cajas de petri

Mechero

Vaso de precipitado

Matraz erlenmeyer

Probeta graduada

OBJETIVO

Elaborar medios de cultivo de acuerdo a procesos, precauciones, y material adecuado además del correcto uso de estos dentro del laboratorio.

CLASIFICACIÓN DE CULTIVOS POR SU COMPOSICIÓN

Se organizan en:

AGAR MC CONKEY

Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).

Cloruro sódico

Peptona

Lactosa

Indicador rojo neutro

Colorante cristal violeta

Sales biliares

El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa.

AGAR CHOCOLATE

Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae. Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y hemina, componentes que podemos encontrar dentro de los glóbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico para el crecimiento es la lisis de los glóbulos rojos.

H2O ultra purificada

Hemoglobina

pH 7,3 ±0,2 a 25ºC

Ágar Base

Cloruro de sodio

Almidón de maíz

Fosfato dipotásico

Peptona de carne

Hidrolizado pancreático de caseína

Agar Chocolate (CHOC) es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una variante del agar sangre. El agar se llama así debido a su parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.

AGAR SANGRE

Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de prácticamente todos los microorganismos que pudieran estar presentes

Agar Agar

Sodio Cloruro

Peptona de Carne

Infusión de Corazón (a partir de 375 g)

Es un agar base (Agar nutritivo) con factores de enriquecimiento

AGAR BILIS VERDE BRILLANTE

Se utiliza para evaluar el grado de contaminación de las muestras de agua, diversos alimentos y otros productos

Sulfito de sodio

Fosfato monopotásico

Fucsina básica

Peptona de gelatina

Erioglaucina

Bilis de buey

Verde brillante

Agar bacteriológico

Es un medio selectivo y diferencial para la determinación de la densidad relativa de bacterias coliformes en agua, residuos y alimentos.

AGAR NUTRITIVO

Se usa para el crecimiento rutinario de varias bacterias ya que en este caldo crecen en la superficie por lo que es mas fácil observarlas.

pH casi neutro (6,8) a 25 °C

agua destilada

0,5% de cloruro de sodio

1,5% de agar

0,3% de extracto de carne/extracto de levadura

0,5% de peptona

El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO POR SU USO

MEDIOS DE TRANSPORTE

Ejemplos

Medio de Stuart

Medio Amies

Tipo de medio utilizado como almacenamiento temporal a especímenes transportados.

Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente

MEDIOS DE CONSERVACIÓN

Medio fluido de tioglicolato con carne molida con sello de aceite mineral estéril a temperatura ambiente (varios meses dependiendo del microorganismo).

Medio de agar inclinado 4ºC (hasta 2 semanas) con sello de glicerol estéril a 4ºC (varios meses dependiendo del microorganismo).

Medio sólido en caja a 4ºC (hasta 1 semana).

Es un medio de cultivo para resguardar cualquier cepa de diferentes maneras.

Se utiliza para aislar y conservar cepas, que por distintas razones nos interese mantener.

MEDIOS DE MULTIPLICACIÓN

El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI),

Es un medio de cultivo que promueve la multiplicación de un organismos y que promueve su crecimiento.

Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado

MEDIOS DE IDENTIFICACIÓN

SS (que es doblemente diferencial),

agar sangre (tipo de hemólisis)

C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -)

Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.

Identificar características de microorganismos para identificarlos.

MEDIOS DIFERENCIALES

Agar cromogénico para Candida

Agar almidón

Agar DNAsa

Medio donde se permite identificar y/o diferenciar (como su nombre indica) una especie de otra, ambas en el mismo medio.

Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros y especies

MEDIOS INHIBIDORES

Agar Sabouraud

Agar chocolate.

Agar McConkey.

Variable mas restrictiva de los medios selectivos

Impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana

MEDIOS SELECTIVOS

•Caldo bilis verde brillante (coliformes totales)

Agar Bacillus cereus

Agar cetrimida (Pseudomonas)

Tipo de medio de cultivo con algunos elementos o nutrientes específicos

Favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

Agar sangre (AS)

Agar Soya Tripticaseína (TSA)

Agar nutritivo (AN)

Agar cuenta estándar (cuenta en placa)

Son aquellos que además de tener sustancias nutritivas normales incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.

Se utiliza para conseguir que proliferen la máxima variedad de microorganismos posibles

MEDIOS COMUNES

Agar C.L.E.D

Agar chapman

Agar nutritivo

Es un medio de cultivo frecuentemente usado para mantener colonias microbianas.

Son aquellos que poseen componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesitan requerimientos especiales.

CLASIFICACIÓN  DE MEDIOS DE CULTIVO POR SU CONSISTENCIA

MEDIOS SEMISÓLIDOS

Se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias

Para determinar la movilidad de los microorganismos microaerófilos.

Es un medio de cultivo hecho con las características del medio solido pero con una cantidad menor de geltificante

Similares a los medios sólidos, la única diferencia es que a estos se les disminuye la cantidad de agar, lo que permite conservar cepas bacterianas y la observación y registro de bacterias móviles.

Agar SIM

Agar MIO

Agar de Hugh-Leiffson

MEDIOS SÓLIDOS

Favorecer el desarrollo de colonias aisladas

Para separar microorganismos

Obtener bacterias aisladas sobre la superficie de los cultivos.

Para el estudio de la morfología de las colonias.

Son medios de cultivo hechos en base a medios liquidos agregandole un geltificante de los cuales los as utilizados son la gelatina y el agar

Se obtienen agregando agar (sustancia de tipo polisacárido que se obtiene de algas marinas) a un medio liquido determinado. Al tener un medio sólido, nos facilita obtener colonias bacterianas aisladas.

Agar SS

Agar Cerebro Corazón

Agar Común

MEDIOS LÍQUIDOS

Uso

diluciones

Rehidratar cepas liofilizadas

Enriquecer cultivos

Homogenizar mezclas

Son medios de cultivo representados en este estado también llamados "caldos"

Composición

Se compone de:

Contienen nutrientes a los cuales se les adicionan sustancias con la capacidad de mantener estables un pH, entre ellos podemos encontrar el caldo nutritivo y caldo peptona.

Alta calidad nutritiva ( Sangre, Leche, Huevo, etc.)

Ejemplos:

Caldo Cerebro Corazón

Caldo Saboureaud

Caldo común

Agua peptonada

METODOS DE ESTERILIZACION

MATERIAL A ESTIRILIZAR

Plásticos como el PFA

Objetos metálicos

Plásticos como: PP, PMP, PFA

Vidrio

Objetos de acero inoxidable

Se divide en:

VÍA SECA

Se subdivide en:

El material a esterilizar se coloca en cámaras especiales que alcanzan elevadas temperaturas. Con este método se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas.

El material se coloca en un horno especial y se somete a altas temperaturas, es un método rápido, económico y no deja residuos

tiempo

2 Horas

temperatura

160ºC

Consiste en colocar el material directamente al fuego hasta que éste se ponga al rojo vivo. De esta forma se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas. Su eficacia depende de la calidad de la llama.

CONDICIONES

La esterilización por vía seca o calor seco es una variante del autoclave en la que no se usa vapor, al ser menos agresivo (en ausencia de agua el calor se transfiere peor al material) se utiliza a más alta temperatura y durante más tiempo.

VÍA HÚMEDA

Condiciones

Presión

Varia hasta 103kPa por encima de la presión atmosférica

Tiempo

De 15- 20 min. de esterilización

Temperatura

Vapor variando hasta mas de 120ºC

Autoclave

Es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua a fin de desinfectar materiales e instrumentos quirúrgicos.

Definición

Es el método de referencia, utiliza calor húmedo en equipos que se denominan autoclaves.

CAMPOS DE APLICACIÓN

VÍA SECA

Aire caliente

En medicina aplica a la esterilización de instrumentos quirúrgicos

Llama directa

En microbiología se utiliza para esterilizar el asa con el mechero

Incineración

Es una forma efectiva de esterilizar el material contaminado a descartar tales como bolsas, papel, uniformes desechables, cadáveres de animales, etc.

VÍA HÚMEDA

Por esta vía se pueden esterilizar materiales metálicos, contenedores quirúrgicos, instrumental de curas, textil como gasas, ropa de quirófano o vendas; gomas, objetos de vidrio como pipetas y biberones, y plásticos.

JARRA DE GASPAK

PARTES DE LA JARRA GASPAK

7.- Placas de petri sembradas

6.- Indicador de Anaerobiosis

5.- Sobre de Gaspak

4.-Catalizador

3.- Soporte del catalizador

2.- Goma

1.- Tapadera

METODOS PARA OBTENER UNA ATMOSFERA ANEROBIA

EXTRACCION

En la jarra a través de la generación de vacío , sustituyendo el mismo por otro gas libre de O2 como el nitrógeno

SOBRES

Es el mas sencillo y consiste un un sobre comercial generador de hidrogeno y CO2 que es activado por agua o la humedad de las placas de agar

La jarra gaspak es un recipiente para simular el ambienete anaerobio en el que viven muchos microorganismos y por consecuencia permitir el crecimiento de varios de ellos que son nutricionalmente exigentes.

Se utiliza para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte de acero inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de atmósfera libre de oxígeno.

CAJAS DE PETRI

MÉTODO DE ESTERILIZACIÓN

Se define de acuerdo al tipo:

VIDRIO

Se pueden esterilizar por los métodos:

Vapor saturado a presión

Vapor fluente

Ebullición

Autoclave (Calor húmedo)

Por aire caliente

Calor seco

PLASTICO

El material de plástico desechable ya se suministra estéril y listo para su uso. Las cajas de Petri se introducen en bolsas de plástico selladas y se esterilizan con oxido de etileno o radiaciones.

TIPOS DE ACUERDO AL MATERIAL DE FABRICACIÓN

Se clasifican en:

CAJA PETRI DE PLASTICO

CAJA PETRI DE VIDRIO

DEFINICIÓN

Es un instrumento de laboratorio que consta de un recipiente redondo de tamaño practico para aislar bacterias aunque no de manera hermética. Fue diseñada en 1877 por el bacteriólogo alemán Julius Richard Petri e de ahí el atributo del nombre.

USO

Sus usos comunes son:

También se emplea para masar sólidos en una balanza.

Se utiliza para observar diferentes tipos de muestras tanto biológicas como químicas. Estas muestras se encuentran encerradas dentro de la placa.

Es utilizado para cultivar bacterias y otros microorganismos.

TIPOS DE ASA

ASA CON PUNTA AGUDA

Su función es tomar colonias muy pequeñas presentes en cultivos polimicrobianos, con el fin de poder subcultivarlas.

ASA EN FORMA DE "L"

Su función mas frecuente es para hacer repiques de cultivos de hongos, especialmente mohos.

ASA ESPATULADA

Existen algunos agentes microbianos cuyas colonias son duras y secas como las micobacterias y algunos hongos. en estos casos se utiliza la asa espatulada.

DEFINICIÓN  GENERAL

Es un instrumento de laboratorio tipo pinza que se emplea para arrastrar o trasvasar inóculos (pequeño volumen que contiene microrganismos en suspensión) desde una solución llamada "solución madre" al medio de cultivo.

ASA RECTA, HILO O EN AGUJA

Se usa para inocular ciertas pruebas bioquímicas, especialmente aquellas que requieren ser sembradas por la técnica de punción.

ASA DE PLATINO EN FORMA DE ANILLO, CALIBRADA.

Esta asa como su nombre lo indica esta calibrada para tomar una cantidad especifica de suspensión microbiana. Se usa cuando es necesario que el inoculo cumpla con lo estandarizado en la técnica.

ASA EN FORMA DE ANILLO, ARGOLLA, NO CALIBRADA

Función

Sirve para tomar el inoculo de una suspensión microbiana (medio liquido) o una porción de colonia (medio solido), para ser sembrado en otro medio de cultivo, bien sea una prueba bioquímica o un medio mas enriquecido o selectivo, según sea el caso.