MÉTODOS DE SIEMBRA
Cuantitativo
Para el recuento de microorganismos
Siembra en placa por extensión o siembra en superficie
En una placa que contenga el medio de cultivo solidificado, se deposita en la superficie 1 ml o 0,1 ml de cada dilución. Se extiende por toda la superficie usando ansa de vidrio o espátula de Drigalsky.
Importante: que el medio de cultivo esté sólido y seco para lograr una extensión uniforme.
Filtración por membrana
Se filtra la muestra a través de un filtro de membrana, se coloca el filtro de membrana en una placa con medio de cultivo y se incuba.
Importante: se utiliza para control biológico de aguas, vinos, jugos y mostos concentrados y para concentrar los microorganismos.
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Siembra por vertido en placa o Pour plate
Se deposita 1 ml de cada dilución en placas estériles, vacías y por duplicado. Luego, se agrega por placa 15 o 20 ml del agar previamente fundido y termostatizado a 45°C en baño maría. Se agita la placa tapada sobre una mesa con movimientos suaves y circulares.
Importante: bajar la temperatura del agar fundido para no esterilizar la muestra. Mover suavemente para integrar de manera uniforme el agar con la muestra.
Jara Marina, Figueroa Martina, Delóngaro Martina, 5°B
Para el aislamiento de microorganismos (cualitativa).
Se utiliza para determinar si hay presencia o no de una determinada especie microbiana en una determinada cantidad de muestra.
Obtención de cultivo puro
De las colonias obtenidas se toma una colonia bien aislada en forma estéril y se estría en una nueva placa con medio de cultivo adecuado. Este procedimiento se repite al menos dos veces para considerar que se ha obtenido un cultivo puro.
Técnicas de aislamiento
Siembra en pentágono
Los trazos se disponen en forma de pentágono.
Siembra por estrías en paralelo
Se hacen seis trazos paralelos en la superficie del medio.
Requiere enriquecimiento
Enriquecimiento
Etapa selectiva. Se le agregan inhibidores o se modifica la temperatura para que aumente el número de microorganismos que se desea aislar e inhibir a la competencia.
Pre-enriquecimiento
Para revitalizar los microorganismos y que adquieran las condiciones fisiológicas adecuadas para su desarrollo. Esta etapa no es selectiva.
Para el mantenimiento de microorganismos
Para posteriores estudios se debe conservar el cultivo puro obtenido
Liofilización
Este método permite aumentar el tiempo de mantenimiento del microorganismo, que pueden ser muchos años. Se realiza en equipos liofilizadores. Consiste en suspender el microorganismo en una sustancia protectora, como suero o leche estéril, para luego congelarlo y deshidratarlo mediante vacío
Liofilizador
Congelación
El microorganismo suspendido en solución crioprotectora se conserva a -20°C o -180°C
Vial criogénico con crioperlas preservantes
Siembra por punción
Similar al método de tubos con agar inclinado. La siembra se realiza con el ansa recta, se descarga con punción en el medio
Siembra en tubos con agar inclinado o pico de flauta
Especialmente para organismos aerobios. El agar inclinado provee una superficie conveniente para el mantenimiento de un cultivo puro. Este método permite conservar microorganismos, dependiendo de sus características, por un período aproximado de meses a 1 año
