Bibliografia: Rutsaert, S., Bosman, K., Trypsteen, W., Nijhuis, M., & Vandekerckhove, L. (2018). Digital PCR as a tool to measure HIV persistence. Retrovirology, 15(1), 16. https://doi.org/10.1186/s12977-018-0399-0
Aunque la terapia antirretroviral es capaz de suprimir la replicación del VIH en pacientes infectados, el virus persiste y rebrota cuando se interrumpe el tratamiento. Para encontrar una cura que pueda erradicar el reservorio latente, es necesario poder cuantificar el virus persistente.
ANTECEDENTES
Durante la terapia antirretroviral (TAR), el VIH puede persistir durante décadas en las células T CD4 + infectadas de forma latente como ADN proviral integrado en el genoma humano. Si se interrumpe la terapia antirretroviral, el reservorio proviral alimenta la viremia de rebote, por lo que se considera un obstáculo importante para la curación del VIH
UNIVERSIDAD MANUELA BELTRAN
PREGRADO PSICOLOGIA
MATERIA: NEUROBIOLOGÍA
INTEGRANTES:
• Yessica Lizeth Anzola Sepulveda
• Paula Díaz Velasquez.
• Donis Acevedo Correa
• Isabela Calderon Paez
Ventajas
Alta sensibilidad (detecta una sola copia).
Precisión en muestras con baja carga viral.
Menor susceptibilidad a inhibidores de la PCR.
Cuantificación reproducible.
PCR DIGITAL
Posibles fuentes de falsos positivos en PCR digital
Contaminación cruzada
Cuando se presenta una alta sensibilidad de la dPCR se puede evidenciar pequeñas cantidades de ADN viral contaminante en reactivos, superficies o instrumentos al momento del análisis.
Al tomar una muestra con baja o nula carga viral puede parecer positiva si se contaminó accidentalmente.
Ruido de fondo en la detección fluorescente.
En los diferentes compartimientos individuales de la dPCR, pueden existir señales fluorescentes no específicas que se interpreten erróneamente como positivas.
Errores en el analisis automatizado
Reacciones inespecificas de las sondas
PCR Tiempo real
La herramienta estándar para cuantificar el ADN del VIH y el ARN viral asociado a las células ha sido la PCR
¿QUE ES?
es una técnica avanzada de cuantificación que ofrece alta sensibilidad y precisión al proporcionar resultados absolutos. Este método se basa en la dilución limitante, donde las moléculas objetivo se destruyen aleatoriamente entre múltiples fracciones.
Plataformas de PCR digital
En la PCR digital la muestra se divide en múltiples particiones. Tras la amplificación por PCR, las particiones que contienen la diana producen una señal y se asignan como positivas
Retos y ventajas de la PCR digital de gotitas
Existen múltiples plataformas de PCR digital, pero en los últimos años, la QX200 se ha convertido en la plataforma de PCR digital más utilizada en todos los campos de investigación.
Lluvia – gota de fluorescencia intermedia
por las gotas con una fluorescencia intermedia, denominadas lluvia, que son difíciles de asignar a la población positiva o negativa lo que dificulta la cuantificación
que afecta la separación de una gota positiva y negativa
Determinación del umbral
En la ddPCR, las gotitas generadas se identifican como positivas o negativas en función de un umbral a un determinado nivel de fluorescencia, y esta proporción se utiliza para calcular la abundancia de la diana mediante la estadística de Poisson. Por lo tanto, determinar un umbral correcto es crucial para una cuantificación fiable.
Más recientemente, la PCR digital está ganando popularidad como un nuevo enfoque para la cuantificación de ácidos nucleicos, ya que permite la cuantificación absoluta del objetivo. Hoy en día existen varias plataformas comerciales de PCR digital que aplican el principio de la PCR digital,de las cuales la QX200 ddPCR de Bio-Rad es actualmente la plataforma más utilizada en la investigación del VIH.
