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por Carolina Diaz 5 meses atrás

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INMUNOANÁLISIS

La citometría de flujo es una técnica avanzada y precisa que permite analizar células y sus componentes mediante la utilización de fluorocromos. Es muy útil en la inmunofenotipificación, especialmente en los campos de la hematología e inmunología clínicas, donde se mide y clasifica las células sanguíneas.

INMUNOANÁLISIS

INMUNOANÁLISIS

CITOMETRÍA DE FLUJO

Método rápido objetivo y cuantitativo de análisis de células/componentes. Determina parámetros celulares, la etapa de maduración o el estado de activación de la célula a través de marcación con fluorocromos.

TÉCNICA
Se realiza tiñendo las células con sondas marcadas con fluorescencia específica frente a esas moléculas y se mide la cantidad ligada por cada célula integrante de la población después de pasarlas a través de un fluorímetro.

Sus componentes son

ORDENADOR

Para adquisición, almacenamiento y análisis de los datos en tiempo real o en modo de matriz de datos.

FOTOMULTIPLICADORES

Detectan y convierten las señales luminosas en impulsos eléctricos y estos en señales digitales. 

SISTEMA OPTICO

Constituido por lentes, espejos dicroicos y filtros, que enfocan el haz de luz para iluminar la muestra y descomponen la emisión de fluorescencia en sus componentes individuales. 

CAMARA DE FLUJO

En la que se orienta el flujo de células y se consigue el paso de éstas en forma individual. 

FUENTE DE LUZ

En general es un rayo láser, por tratarse de una fuente de luz altamente direccionada, monocromática, coherente e intensa. La luz emitida, además, está concentrada en un haz estrecho. La mayoría de los citómetros actuales disponen de un láser de ión argón. 

APLICACIÓN MÉDICA

Inmunofenotipificación: Hematología e inmunología clínicas, mide parámetros como número y clasificación de células sanguíneas.

Trombocitopenia inmunitaria

Identificación, cuantificación y caracterización de inmunoglobulinas unidas a plaquetas usando antisueros IgG e IgM anti-humanos.

Enfermedades pulmonares inmunológicas

Determinar la proporción relativa de linfocitos, macrófagos y granulocitos a partir de gráficas de tamaño contra complejidad celular.

Síndromes linfoproliferativos crónicos
Leucemias agudas

Reconocer a través de anticuerpos los marcadores específicos de los estadios madurativos de los linfocitos B o T, o de las células mieloides infiltradas en la médula ósea.

VIH

Conteo de subpoblaciones de linfocitos.

PARÁMETROS
Extracelulares


De superficie


Citoplasmicos


Nucleares


Su principio es
Hacer pasar a las células en suspensión alineadas frente a un haz de luz.

Se produce información generada por la dispersión de luz y relacionada a la emisión de luz por los fluorocromos presentes.

INMUNOANÁLISIS DE PARTÍCULAS

Se emplean partículas tales como eritrocitos, armazones de látex y de poliglicilmetacrilato, sales de oro y sales de colorante en dispersión, como marcadores para el antígeno y el anticuerpo (Van Hell, 1985).

Consta de
PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS

La aglutinación es una reacción serológica clásica que comprende la aglomeración de una suspensión celular mediante un anticuerpo específico. Las reacciones con antígenos solubles se pueden adaptar a las pruebas de aglutinación mediante el recubrimiento o acoplamiento covalente del antígeno o del anticuerpo específico a un transportador corpuscular.


Sus ventajas son el alto grado de sensibilidad y la gran cantidad de antígenos que se pueden detectar mediante el uso de partículas recubiertas de antígeno o de anticuerpo.


Aplicación médica

DETECCIÓN DE ENFERMEDADES AUTOINMUNES

Situaciones donde los anticuerpos (Ac) se unen a los glóbulos rojos.

TIPIFICACIÓN ABO

Que pueden ser

ANTIGLOBULINAS

Descrita inicialmente por Moreschi en 1908 y redescubierta por Coombs y col en 1945 para demostrar la presencia de anticuerpos incompletos frente a los antígenos de los hematíes.


Los Anticuerpos incompletos como la IgG anti-Rhᵒ no producen aglutinación en una suspensión salina de eritrocitos homólogos.


INDIRECTAS

Implica la aglutinación de células o partículas inertes recubiertas de antígenos o anticuerpos solubles.


Las células o partículas inertes son portadores pasivos y los antígenos pueden ser absorbidos físicamente o acoplados covalentemente a la superficie. Pueden emplearse hematíes humanos o partículas inertes como: Bentonita, látex, colodión y carbón vegetal.

DIRECTAS

Aglomeración de células o de una suspensión de partículas insolubles, como bacterias, hongos u otros organismos, mediante anticuerpos específicos.


La agregación se produce por anticuerpos que poseen dos o más receptores de conjugación para fijar las células o partículas. La reacción es posible con Antígenos sobre la superficie celular o cerca de ella.