Método de Sanger

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Método de Sanger

Consiste en usar DNA como plantilla para secuenciar.

Primer

Permite la elongación de una nueva cadena.

dNTP

Posee un grupo OH

La unión a otro dNTP para la elongación de la nueva cadena.

DNA polimerasa

Incorpora dNTP a la nueva cadena

ddNTP (modificado)

Posee un H

Terminación de la elongación de la nueva cadena

Fluoróforo

Da un color determinando la terminación de la cadena.

Es detectado por láser de un capilar

Atraves de electroforesis capilar es migración de moléculas de una muestra de acuerdo a su tamaño

Resultados

Electroforesis Espectrofotometría

Preparacion

Fragmentación del Genoma. Clonación de Fragmentos de un vector. Secuenciación con ddNTP.

Fragmentación del Genoma.

Clonación de Fragmentos de un vector.

Secuenciación con ddNTP.

Pose Limitaciones

Cantidad de reads baja con respecto a otros equipos. Baja calidad de primeras 10-40 bases el tiempo es extenso costo El tamaño de bases de datos es pequeña.

cantidad de reads baja con respecto a otros equipos.

Baja calidad de primeras 10-40 bases

el tiempo es extenso

costo

El tamaño de bases de datos es pequeña.

Ventajas

la lectura de ADN es larga con respecto a otros equipos.