Cultivo demicroorganismos

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Cultivo de microorganismos

Técnicas de siembra de microorganismos

Técnicas de siembra

Siembra en medio semi-sólido

Es usado principalmente para:

Determinación de movilidad

Crecimiento solo en el sitio de punción

Si la movilidad es positiva habrá turbidez difusa en el medio

Pruebas bioquímicas

Siembra en medio sólido

Técnicas para favorecer crecimiento

Puede ser por:

Estriado simple

Picadura

Esta consiste en el uso de un agar inclinado

Técnicas para favorecer crecimiento

Instrumentos de siembra

Asa bacteriológica, hisopo

Patrones de estriado que favorecen crecimiento masivo

Estría cruzada

Estría en cuadrante radial

Estría en cuadrantes

Estría recta

Técnicas de aislamiento:

Aprovechamiento de características particulares de algún μoo

Formación de esporas, anaerobio, sustratos poco comunes

Mediante la utilización de medios de cultivo selectivos

Contienen alguna sustancia que inhibe a algunos μoos pero no afecta el crecimiento del μoo que se desea estudiar

Por agotamiento de un pequeño inóculo en un medio de cultivo sólido

Diferentes técnicas de siembra

Por separación física

diluciones

Medio líquido

Siembra en medio líquido

Se puede resumir de la siguiente forma:

Objetivo de la siembra

Considerar la presentación del medio líquido

Instrumento detransferencia

Depende del tipo de muestra y del objetivo de la siembra

Tipo de muestra de procedencia

Tipo de medio Preparaciones previas

Consta de una serie de pasos para llevarse a cabo

Técnica aséptica

Instrumentos para transferencia de microorganismos

Asa bacteriológica, micológicay aguja

Pipeta Pasteur, serológica y la automática

Sigue una serie de recomendaciones de seguridad para llevarse acabo:

Utilización de medios de cultivo estériles

Utilización de instrumentos para transferencia estériles

Trabajo dentro de la "Zona aséptica" (cerca de la flama)

Limpieza de la zona de trabajo / manos

Método o procedimiento para evitar que los gérmenes infecten una cosa o un lugar

Colonia

Morfología

Pigmentación

El pigmento no se aprecia en las células individuales a que se debe a gránulos intracelulares muy pequeños para verse con luz transmitida.

Esta característica es muy común en las bacterias saprófitas en las que las colonias aparecen rojas, anaranjadas, amarillas, etc.

Superficie

Puede ser uniformemente brillante y suave o puede ser estriada con muescas concéntricas o quebradas.

Consistencia y textura

Hasta una colonia viscosa que se pega al asa y forma filamentos o hilos mucosos cuando se trata de separarla del agar.

La consistencia de las colonias puede variar desde una colonia seca que puede moverse sobre el agar con el as.

Forma

Está determinada por su borde y su espesor.

Tamaño

Esta característica es bastante constante dentro de las especies y puede ir desde colonias muy diminutas hasta un diámetro de varios milímetros.

Características:

Subtopic

Es una agrupación de bacterias formada a partir de la reproducción de una Unidad Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio sólido

Una UFC puede ser un solo microorganismo o bien un grupo de microorganismos de una misma especie

Cultivo de microorganismos

2 Tipos:

Cultivo mixto

Varios tipos de microorganismos

Cultivo puro

Para obtener un cultivo puro a partir de una muestra de un ambiente natural es necesario aplicar "técnicas de aislamiento"

Sólo existe un tipo de microorganismo

Cultivo

Un cultivo de microorganismos es una población microbiana obtenida en el laboratorio, bajo condiciones controladas

Prueba de pureza y conservación

Colecciones de cultivos

Adquisición, autentificación, reproducción, preservación,distribución y desarrollo

Microorganismos y líneas celulares de referencia

Cepa

Poseen una dotación genética simila r y conservan ciertas características por generaciones

Conjunto de microorganismos que derivan de progenitores bien definidos

Cepario

Identificación de sus características genotípicas y fenotípicas

“Biblioteca de microorganismos”

Técnicas de conservación

A largo plazo

Liofilización

Congelación

A corto plazo

Guardar en refrigeración

Resiembras periódicas

Una vez "aislado" → siembra en 2 tubos

Reserva

Trabajo

Prueba de pureza

Observación de características:

Microscópicas

Morfología, agrupación, Gram, etc.

Macroscópicas

Morfología colonial

Después de aplicar técnicas de "aislamiento" al microorganismo de interés

Esto garantiza el "aislamiento"

Condiciones de incubación

Control de oxígeno en los cultivos microbianos

Para cultivo sólido de bacterias anaerobias

Se utilizan jarras de anaerobiosis

Para las bacterias anaerobias estrictas

Se utiliza medios reductores como cistina, tioglicolato o Na2S.

Para esto puede haber 2 modos:

Introduciendo aire estéril en el medio

Aumentando la ventilación por agitación constante del medio líquido inoculado

Los microorganismos aerobios estrictos crecen sobre la superficie de placas de agar y en la parte superior de medios líquidos.

Pero si se quiere obtener organismos aerobios en grandes cantidades se debe incrementar la exposición del medio a la atmósfera

Nutrición y medios de cultivo

Medios de cultivo

Clasificación de lo medios de cultivo

Por su aplicación

De mantenimiento / transporte

Preservar la viabilidad de las células al ser transportadas al sitio del estudio.

De valoración / de prueba

Vitaminas y aminoácidos

Efecto de antibióticos / desinfectantes

Para cuantificación de bacterias

Cantidad de moos, calidad microbiológica de agua, leche, etc.

Enriquecidos

Ejemplo: Agar sangre

Permiten el desarrollo de moos exigentes Son químicamente complejos o ricos en nutrientes

Diferenciales

Ejemplos: MSA, EMB, MacConkey, Agar sangre

Sustancias nutritivas o indicadores que permiten poner de manifiesto alguna actividad metabólica de un moo

Selectivos

Ejemplos: MSA, EMB, MacConkey

Favorecen el desarrollo de un moo específico y suprimen el crecimiento de otros

Por su estado físico

Semi-sólidos

0.4% a 0.8% de agar

Determinaciones de movilidad

Sólidos

1.5% a 2% de agar

Medio líquido + agente solidificante

Separar moos → desarrollo de colonias aisladas

Líquidos

Enriquecer cultivos

Rehidratar

Hacer diluciones

Por su composición

Complejos

Cultivos de tejidos (riñón, pulmón, embriones de pollo)

Extractos de tejidos animales o vegetales

Ingredientes de naturaleza compleja

Sintéticos / químicamente definidos

Elaboración minuciosa

Alto grado de pureza

Importancia del pH

Para evitar cambios bruscos de pH

Uso de amortiguadores (Buffer)

Debe haber un valor adecuado de pH que permita iniciar el crecimiento y que no limite la etapa posterior de desarrollo

Para el cultivo correcto de un microorganismo determinado es necesario conocer:

Los nutrientes en exceso pueden inhibir el crecimiento o resultar tóxicos

Sus exigencias nutricionales y ademas que tanto necesitan

Es una preparación líquida o sólida utilizada para el crecimiento, transporte, o mantenimiento de microorganismos

Factores de crecimiento

Estos son:

Bases nitrogenadas

Aminoácidos,

Vitaminas,

Generalmente porque el microorganismo no es capaz de sintetizarlo

Son denominados como: Auxótrofo

Bebe suministrarse en un medio de cultivo

Son compuestos orgánicos que se necesitan en muy pequeñas cantidades, sólo por algunas células

Son denominados como: Protótrofo

Nutrición microbiana

El 5% restante corresponde a los elementos traza:

Mn,Zn,Co, Mo,Ni,Cu

Más del 95 % del peso seco de la célula microbiana está constituido por unos pocos elementos:

C, O,H, N,S,P,K,Ca, Mg,Fe

Nutrientes → Elaboración de componentes celulares

Crecimiento microbianox