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Fijación, tinción de Gram

Para obserbar las bacterias bajo el microscopio es preferible teñirlas ya que el colorante aumenta el contraste, estos colorantes estan cargados positivamente y son organicos

La pared celular de la bacterias Gram - esta constituida por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa. Mientras que las bacterias Gram+ poseen una pared celular gruesa conformada por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa.

La composición química y el contenido de peptidoglucano en la pared celular de las bacteritas Gram + y - determinan y explican las características tintoriales.

TINCION GRAM + Y -

Colocar una muestra de colorante primario cristal violeta posteriormente se coloca Lugol, sirve como mordiente para fijar el colorante e impedir la salida del cristal violeta. Se añade alcohol para producir decoloración de bacterias Gram negativas. Por ultimo se añade safranina, sirve como colorante secundario o para teñir bacterias que no pudieron retener complejo de cristal violeta. Finalmente se lava con abundante agua y se deja secar.

Crecimiento Microbiologico

Medio Liquido: Se manifiesta por: Formación de velo, cuando los gérmenes cultivados son aerobios estrictos, su desarrollo como una masa de células que flotan en la superficie de este medio.

Sedimentos: Las células se encuentran ubicadas en el fondo del tubo, sin embargo se pueden poner en suspensión si se agitan.

Enturbiamiento: Muchas bacterias se desarrollan produciendo enturbiamiento a causa de la suspensión de numerosas células en el liquido .

Medio Solido: Las bacterias microscópicamente durante el crecimiento en un medio solido, al multiplicarse forman masas visibles macroscopicamente denominadas colonias

El aspecto de la colonia tiene relación con diversos factores como: movilidad de la bacteria, presencia de capsula, variación de color , textura o adherencia al medio. Características de la colonia , tamaño, forma, forma de los bordes, color.

Medio Semisólido: El método de siembra es por puntura, el desarrollo permite observar el movimiento de las bacterias luego de su incubación.

Puede presentar dos tipos de crecimiento, uno por linea de siembra en este caso se puede deducir que la bacteria es inmóvil ya que se desarrollo en la linea de puntura. El segundo tipo de crecimiento de los costados y la bacteria se cponsidera mobil ya que crece en todas las direcciones

Aislamiento de cultivo

Tomar una placa petri y rotular una cepa.

Seleccionar una colonia aislada, esterilizar el asa de siembra hasta que encandezca.

Enfriar el asa sobre la placa donde no haya crecimiento de cultivo.

Seleccionar una colonia

Hacer una estria en 1/4 de la placa

Esterilizar el asa de siembra nuevamente y repetir el proceso de estria y esterilizacion dos veces mas.

Reproduccion del medio

Pesar la cantidad necesaria correspondiente al volumen del medio que se elaborara, siguiendo las instrucciones del fabricante

Integrar el medio pesado en el matraz, añadir el volumen requerido de agua destilada requerido.

Si el medio es liquido agitar hasta obtener su completa disolución. Si el medio es es solido se calentara y agitara el hasta que se derrita. Se puede observar que la turbidez desaparece.

El calentamiento se puede realizar con un termo agitador magnético o usando un trípode y un mechero bunsen . Retirar el medio cuando llegue a ebullición

Colocar un tapon de algodon graso y recubrir con papel aluminio y esperar a que enfrie.

Prender mechero para esterilizar placas petri y matraz ( utensilios)

Retirar el tapón de algodón y recubrimiento para esterilizar los utensilios

Vertir el medio en las placas ya esterelizadas y esperar que solidifique