Sequenciamento

Mer av detta

Alinhamento-TI e Negócio

av Rebeca Moysés

Framework

av Alisson Nascimento

PETRÓLEO

av Bruna Celestino

NÉFRON

av Evelyn Lisboa

Indivíduos (única amostra)

Haplótipos (Pool de amostra)

Extração do DNA

Clonagem

Reação em Cadeia da Polimerase

Purificação do DNA

Sequenciamento

Edição de sequências MEGA

1º Passo: Abra as Sequências Senso e Antisenso disponíveis em formato .seq no explorador de alinhamento (Selecione: Align; Edit/Build Alignment; Create a new alignment; DNA or Protein; Edit; Insert Sequence from File).

2º Passo: Abra o eletroferograma das sequências senso e antisenso a partir do arquivo .abi (Selecione: View/Edit trace Data From Sequences)

3º Passo: Fazer o complemento reverso da sequência antisenso (Selecione: Date; Reverse complement)

4º Passo: Insira a sequência dos primers senso e antisenso. Nomeie as sequências - primer F e R. Faça o complemento reverso do primers antisenso (R). Encontre o primer senso (F) no início da sequência antisenso e o primer antisenso (R) no final da sequência senso. Exclua os primers e as sequências alinhadas a eles (Selecione: o símbolo +; copie e cole as sequências em cada linha; Date; Reverse complement).

5º Passo: Faça o alinhamento das sequÊncias (Selecione: W; Align DNA; yes; Ok).

6º Passo: com os eletroferogramas abertos, faça o complemento reverso do eletroflerograma antisenso.

7º Passo: Verifique a região de baixa qualidade e exclua as sequências/bases dessa região.

8º Passo: Clique em uma das sequÊncias do explorador de alinhamento e gere uma fita consenso - copie e cole.

9º Passo: Analise pelos eletroferogramas as regiões das sequências que apresentem gaps, bases diferentes no alinhamento (IUPAC) e de forma conservacionista edite as sequências da fita consenso.

10º Passo: Exporte o arquivo no formato FASTA e salve-o.