O processo de transformação permite a introdução de DNA, como plasmídeos, em bactérias, incluindo a E. coli. Durante este processo, as bactérias são submetidas a um choque para incorporar o DNA estranho.
Como um exemplo de como uma enzima de
restrição reconhece e corta uma sequência de
DNA, vamos considerar Eco RI, uma enzima de
restrição comum usada em laboratórios
Muitas enzimas de restrição fazem
cortes escalonados, produzindo
terminações com DNA fita simples. No
entanto, algumas produzem
extremidades rombas.
Enzimas de restrição são enzimas
que cortam o DNA. Cada enzima
reconhece um ou mais sequências
alvo e corta o DNA nestas
sequências ou perto delas.
Plasmídeos
Um plasmídeo geralmente tem um gene
de resistência aos antibióticos, que
permite que as bactérias sobrevivam na
presença de um antibiótico específico.
Assim, as bactérias portadoras de
plasmídeo podem ser selecionadas em
placas com nutrientes contendo o
antibiótico.
Os plasmídeos e outros DNA podem ser
introduzidos nas bactérias, como as
inofensivas E. coli utilizadas em laboratório,
num processo chamado transformação.
Durante a transformação, é dado um choque
(por exposição a alta temperatura, por
exemplo) a células bacterianas especialmente preparadas que as encoraja a incorporar DNA
estranho.
A clonagem molecular pode fazer com que genes estranhossejam expressos em bactérias e leveduras ou mesmo em outras células superiores. As indústrias química, farmacêutica e agrária investem milhões em seu desenvolvimento. Esta tecnologia permite estudar os genes e os seus produtos, obter organismos transgênicos e realizar terapia gênica.
Etapas da clonagem molecular
Escolha da matéria-prima correta para a clonagem
As moléculas de DNAc são inseridas do DNA do vetor para criar um clone de biblioteca
RNSm é convertido em DNAc por reações enzimáticas
Isolar colônias
Bibliotecas de DNA genômico representam sequências completas de organismos
Clonagem de DNA é a confecção de
cópias idênticas um pedaço de DNA
Função da DNA ligase
Na clonagem de DNA,
enzimas de restrição e
DNA ligases são
utilizadas para inserir
genes e outras frações
de DNA em plasmídeos
DNA ligase é uma
enzima de adesão de
DNA. Se dois pedaços
de DNA tiverem
terminações
complementares, a
ligase pode ligá-las
para formar uma
molécula de DNA
única e contínua.
