material y metodos

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ISO 14001 2015

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bacteriología

由CRISTIAN MATEO VILLAMIL BUESAQUILLO

material y metodos

RESULTADOS

En el hospital 2 la mayor concentración de bacterias fue en el área de terapia intensiva de adultos (448 UFC/m3)

En el hospital 1 la mayor concentración de bacterias fue encontrada en el área de terapia intensiva de niños (232 UFC/m3)

Respecto a las aerobacterias encontradas en los bioaerosoles analizados

En el hospital 2, fue de 90 a 548 UFC/m3 y el testigo de ambiente exterior presentó 122 UFC/m3

el hospital 1 presentó un intervalo de 40 a 232 UFC/m3

Hospital 2

el intervalo fue de 32 a 442 UFC/m3,

Hospital 1

Subtopic

concentración de propágulos fúngicos que osciló en un intervalo de 56 a 184 UFC/m3

Identificación de propágulos fúngicos

El programa de amplificación fue predesnaturalizado a 95 oC por 5 min;

extensión final a 72 oC por 10 min

50/55/60 oC por 30 s y 72 oC por 1 min

35 ciclos a 95 oC por 30 s,

La identificación molecular de los propágulos fúngicos se llevó a cabo mediante la amplificación de la región 5.8 S de los genes ribosómicos.

CONDICIONES DE LA TECNICA DE REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA

primera extensión a 72 oC por 1 min y una extensión final de 5 min a 72 oC

seguido por 30 ciclos de amplificación de PCR con una desnaturalización a 94 oC por 30 s, ali- neamiento a 57 oC por 40 s

el templado fue inicialmente desnaturalizado a 95 oC por 5 min

gen). El programa se llevó a cabo en un Mastercycler Gradient (Eppendorf AG, Hamburg, Modelo: 5331),

0.25 μL de polimerasa Platinum Taq DNA 5 U/μL (Invitro- gen

1 μL de solución de dNTP (10 mM), 1 μL de cada iniciador directo y reverso (30 mM)

5 μL de 10 × amortiguador PCR, 1.5 μL de MgCl2 (50 mM),

OBTENCION DE MUESTRAS DE AIRE

EQUIPOS UTILIZADO

Equipo de captura de aire contenía de medio de cultivos 73 mm de diámetro x 6 mm de alto

Muestreador microbiologico ambiental de la marca Millipore (Sistema M. Air T)

Se basa en el principio de inercia de impacto de Anderson y usa una serie de coladores con cerca de 1000 microperforaciones, lo cual reduce el potencial de colonias sobrelapdas y desecación del medio.

PASOS DE CONSIDERACIONES

Se tomaron casetes no abiertos e incubados bajo las mismas condiciones como testigo

Tiempo transcurrido entre la toma de muestras no fue mayor 12 horas.

PROTOCOLO UTILIZADO

Toallas satirizantes Milliipore

Piezas de equipo de monitoreo ambiental desinfectadas.

Guantes desinfetados con una solucionar de etanol al 70%

Se considero las recomendaciones metodológicas descritas por el Instituto Nacional de Seguridad e Higiene de España

En la ciudad de león, Guanajuato, México se evaluaron a 2 hospitales, para evaluar la calidad de aire

IDENTIFICACIO DE BACTERIAS

para dar más confianza a los resultados y verificar si se trataba del mismo microorganismo se utilizaron tres bases de datos adicionales

Las cuatro bases de datos fungieron como herramientas para el alineamiento y clasificación de las secuencias

SILVA database project

Greengenes Project

Ribo- somal Database Project II

Para la identificación del género y especie de las bacterias aisladas, las secuencias fueron alineadas y comparadas con las secuencias ARNr 16S de las bases de datos National Center for Biotechnology Information mediante el programa BLAST (Gasch et al. 2000)

Se realizó la amplificación y secuenciación de regiones conservadas del gen 16S ribosomal

EXTRACCION DE ADN de los cultivos

Todos los cultivos se incubaron en baño maria con agitacion por 12 h a 37 oC

Los diferentes aislados de bacterias se sembra- ron en 3 mL de caldo soya tripticasa (CST), más un duplicado del medio sin inocular como testigo nega- tivo.

OBSERVACIONES MORFOLOGICAS

COLONIAS DE BACTERIAS

BORDES

FORMA

HONGOS

SE CONSIDERO

BORDE Y ELEVACION

TAMAÑO

VELOCIDAD EDE CRECIIMIENTO

COLOR

TEXTURA

Fueron cultivados durante 7 dias en APD a 25 oC