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Tecnicas de confirmación

Técnica de tinción

Tecnica gram: Por este procedimiento la cabeza se tiñe de color rosa y el cuerpo color azul.

El frotis se seca ligeramente con el calor de un mechero. a) Se añade el reactivo de cristal violeta durante 1 min. b) Lavar con agua destilada c) Cubrir nuevamente con la solución 2 durante 1 min; tirar el exceso de lugol y decolorar con agitación utilizando el reactivo 3 durante 30 seg. d) Secar con papel filtro y cubrir la reacción con el reactivo 4; dejarlo actuar de 10 a 30 seg. e) Lavar con agua destilada y observar con el microscopio.

REACTIVOS: Solución A, crystal violeta 2gr, alcohol etílico absoluto 20ml. Solución B, Oxalato de amonio 0.8 gr, Agua destilada 80ml. Mezclar soluciones A y B y embazar en frasco ámbar. Solución 2 iodo iodurada, Iodo metálico 1gr, Iodo de potacio 2gr, agua destilada 300ml. 3 Decolorante, Alcohol etílico absoluto (95%). 4 Colorante de safranina, safranina (2.5% alcohol etílico) 10ml, agua destilada 100ml

Descripción del espermatozoide

El liquido espermático humano contiene de 70 a 150 millones por ml; cuenta con una cabeza oval que mide 4.6 X 2.6 X 1.5 micras, una pieza intermedia que contiene mitocondrias, y una cola formada por 9 filamentos

Debido a que las bacterias atacan su tallo se hace difícil su identificación por lo cual es importante su pronta recolección, suelen sobrevivir de 30min a 12hrs, y en el útero de 4 a 6 días.

Prueba de la identificación

Fosfatasa ácida como medio de identificación

La identificación de fosfato ácida solo servirá como orientación ya que no solo el semen contiene fosfato ácido.

Interpretar resultados Aparecerá la coloración violeta intensa en la muestra problema dentro de los 5min siguientes

PROCEDIMIENTO. La dubitable se coloca entre 2 hojas de papel filtro, se coloca sobre una lamina de vidrio donde previamente se puso testigo negativo, positivo y muestra problema, después se agregan 10 gotas de reactivo con una pipeta pasteur.

REACTIVO: Solución 1, Orto Dianisidina tetrazotizada 1gr; Acetato de sodio 20gr; Acido acético 10ml; agua destilada 100ml. Solución 2, naftil fosfato de sodio .8gr; agua destilada 10ml. Mezclar 10ml de solución 1;89 ml, de agua destilada y 1.0ml de la solucion 2 en frasco ambar.

Recolección y Embalaje

Materiales necesarios: Tubos de ensayo de 15cm L y 1cm A, Hisopos de madera 15cm L, Laminillas porta objeto y Ampolletas de solución salina.

Todas las muestras tomadas llevaran lo siguiente:

Etiquetas con el numero de expediente, fecha y hora en que se recolecto, nombre de la persona a la que se le tomó, nombre del investigador que lo recolecto.

Para la recolección de una muestra se necesitaran recolectar 3 veces el frotis dubitable

Tercera: Se tomara con idénticas condiciones a la primera toma y servirá para aclaraciones o confrontas.

Segunda: Primero se humedece el hisopo con solución salina, después se recolectara la muestra y se pondrá el hisopo en un tubo de ensayo. (cuantificación de la fosfatasa ácida)

Primera: Se usa el hisopo para recolectar el frotis, después se coloca sobre una laminilla porta objetos, la cual se le pasara una flama por debajo, así mismo el hisopo con el que se recolecto se colocara en un tubo de ensayo con 2ml de solución salina.

Componentes

El semen es un liquido viscoso y opalescente de color blanco grisaseo

Su pH es de 7.36 a 8, también contiene sustrato para la coagulación.

Este sustrato posee: enzimas licuantes, hormonas, fosfatasas, acidas, espermina, ácido cítrico, lípidos, proteínas zinc, antígeno soluble, etc.