BIOTECNOLOGIE: TECNICHE E STRUMENTI

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BIOTECNOLOGIE: TECNICHE E STRUMENTI

Studiare il genoma in azione

Genomica

Metagenomica: si occupa dell'analisi dei genomi di tutte le speci presenti in un determinato ambiente, al fine di valuare la variabilità genetica, ovvero la biodiversità

Genomica comparativa: si occupa del confronto tra i gebnomi di organismi appartenenti a specie diverse, con lo scopo di stabilire le parentele evolutive

Genomica funzionale: disciplina che si pone come obiettivo l'identificazione di tutti i geni di un organismo e di determinarne la funzione

Sequenziamento e lettura del DNA

Elettroforesi

Procedimento

La sequenza che emerge sarà complementare a quella che volevamo sequenziare

Partendo dal frammento più piccolo verso il più grande possiamo risalire all'ordine con cui i nucleotidi sono stati incorporati

I pozzetti vengono riempiti con le soluzioni di DNA

In ogni miscela ci sono frammenti di lunghezza diversa

I frammenti di DNA vengono uniti ai reagenti necessari per la sintesi dei filamenti complementari e suddivisi in 4 proovette ognuna contenente uno dei dideossinucleotidi

Il genoma da sequenziare è digerito con enzimi di restrizione

Separa molecole cariche grazie all'applicazione di un campo elettrico

Poliacrillammide avente maggiore porosità

Gel di Agarosio il quale da solido forma una rete che permette ai frammenti piccoli di passare veloce mentre ai frammenti grandi di passare più lentamente

Amplificazione del DNA

Reazione a catena della polimerasi (PCR)

Materiale utilizzato: DNA stampo, primer(oligonuclepotidi), DNA polimerasi e cloruro di magnesio (MgCl2).

Procedimento: 1) Denaturazione del DNA 2) Rinaturazione del DNA 3) Allungamento del DNA

Clonazione del DNA

Selezione delle cellule conteneti il plasmide

Inserimento del plasmide ricombinante nella cellula ricevente

Unione dei due frammenti di DNA grazie alla DNA ligasi

Taglio del DNA con gli enzimi di restrizione