BIOTECNOLOGIE: TECNICHE E STRUMENTI
Studiare il genoma in azione
Genomica
Metagenomica: si occupa dell'analisi dei genomi di tutte le speci presenti in un determinato ambiente, al fine di valuare la variabilità genetica, ovvero la biodiversità
Genomica comparativa: si occupa del confronto tra i gebnomi di organismi appartenenti a specie diverse, con lo scopo di stabilire le parentele evolutive
Genomica funzionale: disciplina che si pone come obiettivo l'identificazione di tutti i geni di un organismo e di determinarne la funzione
Sequenziamento e lettura del DNA
Elettroforesi
Procedimento
La sequenza che emerge sarà complementare a quella che volevamo sequenziare
Partendo dal frammento più piccolo verso il più grande possiamo risalire all'ordine con cui i nucleotidi sono stati incorporati
I pozzetti vengono riempiti con le soluzioni di DNA
In ogni miscela ci sono frammenti di lunghezza diversa
I frammenti di DNA vengono uniti ai reagenti necessari per la sintesi dei filamenti complementari e suddivisi in 4 proovette ognuna contenente uno dei dideossinucleotidi
Il genoma da sequenziare è digerito con enzimi di restrizione
Separa molecole cariche grazie all'applicazione di un campo elettrico
Poliacrillammide avente maggiore porosità
Gel di Agarosio il quale da solido forma una rete che permette ai frammenti piccoli di passare veloce mentre ai frammenti grandi di passare più lentamente
Amplificazione del DNA
Reazione a catena della polimerasi (PCR)
Materiale utilizzato: DNA stampo, primer(oligonuclepotidi), DNA polimerasi e cloruro di magnesio (MgCl2).
Procedimento: 1) Denaturazione del DNA 2) Rinaturazione del DNA 3) Allungamento del DNA
Clonazione del DNA
Selezione delle cellule conteneti il plasmide
Inserimento del plasmide ricombinante nella cellula ricevente
Unione dei due frammenti di DNA grazie alla DNA ligasi
Taglio del DNA con gli enzimi di restrizione
