por Felipe Riveroll Aguirre 6 anos atrás
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Mais informações
Represión de genes basada en dCas9 (CRISPRi)
Limitado a genes que contengan motivos adyacentes protoespaciadores que flanqueen el sitio de inicio transcripcional
Efectos polares en ARNm policistrónicos
Alta especificidad de diana para el gen de interés
ARN de interferencia (RNAi)
Más efectos fuera del blanco que la edición genética, desencadenados por regiones semilla cortas de 6-8 bases.
Inducible, ajustable y reversión supresible de la expresión genética
Promotores represibles
Las mutantes tienen que ser generadas individualmente
Represión específica del gen de interés
No siempre lleva a una supresión completa
Variedad Amplia de organismos
Suceptibles de cribado de alta capacidad (high-througput screening)
Edición genética
Alto costo y obtención de las enzimas generadoras ZFN y TALEN a largo plazo
los sitios de corte que se amplifican elevadamente pueden desencadenar defectos de proliferación
CRISPR es escalable a todo el genoma
Gran flexibilidad en términos de la modificación introducida
Recombinación homóloga
No funciona de manera eficiente en todas las especies
Usada para KO completo
Pocos efectos fuera del blanco
KO completo posible
Métodos
Trampa de genes (Gene trapping)
Aplicable solo a especies con genomas que contengan intrones
Permite la identificación del gen alterado
Reporta la expresión del gen atrapado
Transposones
Acoplada con barcoding, permite análisis en bulto (bulk) de pozas de mutantes en distintas condiciones
Cuando es acoplada con métodos de secuenciación de nueva generación permite una máxima capacidad y rapidez
Mutagénesis química
Alto costo de mapeo genético y capacidad reducida (low-throughput)
Varios genes mutados por genoma
Simple y de bajo costo
aplicable solo a células u organismos haploides
No garantiza la pérdida de función del gen mutado
Forma más rápida de generar mutantes
Subtema
Mutación supresora
intergénica
suprime el efecto de una mutación anterior en otro gen
intragénica
suprime el efecto de una mutación anterior en el mismo gen
Suprime el efecto de una mutación anterior en un sitio distinto
Mutación letal
Causa muerte prematura
Causa una pérdida parcial o completa de función
Mutación de ganancia de función
Causa la aparición y de una nueva característica o función o causa la aparición de una característica en un tejido incorrecto o a un tiempo inapropiado
Mutación de pérdida de función
Mutación inversa (Reverse mutation)
Cambia el fenotipo mutante a wild-type
Mutación directa (forward mutation)
Cambia el fenotipo wild-type a un fenotipo mutante
Mutación con desplazamiento del marco de lectura (Frameshift mutation)
Deleción/inserción que altera el marco de lectura del gen
Deleción
Eliminación de uno o más nucleótidos
Inserción
Adición de uno o más nucleótidos
Mutaciones puntuales
Tipos
Nivel aminoácidos (Regiones codificantes)
Sin sentido (non sense mutation)
El codon de un aminoácido es cambiado por uno de terminación
Producen productos protéicos completamente inactivos
Con cambio de sentido (missense mutation)
Cambia el codon por un aminoácido distinto, también se conocen como mutaciones no sinónimas
Si el remplazo es por un aminiácido de un grupo químico distinto resulta en una sustitución no conservativa
Da origen a cambios severos en la estructura y función de las proteínas
Neutral
Cambia la secuencia de aminoácidos de una proteína sin alterar su capacidad funcional
Sinónimas
La mutación cambia un codon por otro para el mismo aminoácido. También se les conoce como mutaciones silenciosas
Nivel Nucleótidos
Transversiones
Lo opuesto, remplazo por una base de una categoría química distinta
Transiciones
Remplazo de una base por otra de la misma categoría química
Sustitución de un nucleótido por otro, resultado de errores en la replicación que ocurren con una probabilidad de 10-10
Las mutaciones solo afectan a éstas células, y se transmiten durante la mitosis, pero no pueden ser transmitidas a una generación subsecuente de organismos
Células del cuerpo, sin descendientes evolutivos; existen solo para ayudar a las células germinales a sobrevivir y propagarse.
Mutaciones, pueden ser propagadas a generaciones subsecuentes
Células reproductivas especializadas (gametos), pueden llevar una copia del genoma a la siguiente generación de organismos
La inactivación o pérdida causa un arresto irreversible del crecimiento
Desarrollo de cigoto a adulto fértil
