Digestion / Cartographie de l'ADN plasmidique
Cartographie du plasmide
Détermination du sens d'insertion du plasmide
Comparaison avec les résultats attendues
Hind III
Eco RI
BamHI
Clonage
Sélection des bactéries
Culture des colonies en milieu liquide
Repiquage des colonies positives
Culture sur antibiotique de sélection
Ampicilline
Préparation des bactéries
Electroporation des bactéries
Choc thermique
Choc électrique
Ligation de l'ADN d'intérêt
Enzyme de ligation : Ligase
Digestion par enzymes de restriction
Isolation de l'ADN plasmidique
Lavage de l'ADN
Ethanol
Laisser évaporer
Précipitation différentielle de l'ADN plasmidique / Solution S3
Acétate de potassium
Précipite d'ADN plasmidique lié au SDS
pH = 4 (acide)
Stoppe la dénaturation controlée
Dénaturation controlée de l'ADN plasmidique / Solution S2
SDS
Détergent
Déstructuration des membranes
NaOH
pH basique
Dénaturation des protéines
Digestion des bactéries / Solution S1
EDTA
Chélateur d'ions divalents (Ca, Mg)
Permet d'inactiver les DNases qui dépendent de ces ions
RNase I
Clive l'ARN
Centrifugation des bactéries
Culot de bactéries
Mini préparation d'ADN plasmidique
