DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA POR EL MÉTODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA

Honelako gehiago

Capacidad de difusión de Gases O2 Co2

by stevenlara97 .

celulas de la sangre

by Yan Ramos Perez

FISIOLOGÍA SISTEMA CARDIOPULMONAR

by leisy calderon

Componentes

by Delgadillo Rodriguez Omar

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA POR EL MÉTODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA

EL MÉTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA

VALORES DE REFERENCIA

B. MUJERES 12.5 a 16.5 g/dl 7.5 a 10.33 mmol/l

A. HOMBRES 15 a 20 g/dl 9.3 a 12.4 mmol/l

CURVA DE CALIBRACIÓN

f) Extrapola las absorbancias de las muestras problema.

e) Trazar una línea perpendicular que parta del vértice (O) y toque el mayor número de puntos.

d) Graficar en papel milimétrico, en las ordenadas (Y) las absorbancias y en las abscisas (X) las concentraciones.

c) Medir la absorbancia de cada dilución en el espectrofotómetro a 540 nm, contra el blanco (B).

b) Pipetear con precisión, de la solución valorada de Cianometahemoglobina (St) de concentración de 20 g/dl y del Reactivo de Drabkin, en cada uno de los tubos correspondientes y mezclar bien.

a) Marca 5 tubos de ensaye de 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10, 15, 20 g/dl

5) Calcular la concentración de la Hemoglobina, a partir de la Ley de Beer o bien extrapolar en la curva de calibración

PROCEDIMIENTO

4) Ajustar el espectrofotómetro a cero de absorbancia con el blanco de reactivo (B) a 540 nm. y se lee la absorbancia del tubo problema.

3) Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar la mezcla por 5 minutos. Pasar a las celdas.

2) Con la pipeta de Shali, se toma 0.02 ml (20l) de sangre limpiando perfectamente la pipeta por fuera con un segmento de papel desechable humedecido con solución salina, se pasan al tubo, lavando la pipeta 2 o 3 veces, por aspiración y expulsión del reactivo dentro de la misma.

1) Se marcan 2 tubos de ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y se colocan 5 ml. del Reactivo de Drabkin en cada uno.

FUNDAMENTO.

Para convertir la Hb-O2 en Hb-CN se utiliza el Reactivo de Drabkin, el cual contiene ferricianuro de potasio K3Fe (CN)6 que convierte el Fe++ en Fe+++ convirtiéndose en metahemoglobina. Luego el KCN del mismo reactivo se combina para formar la Cianometahemoglobina, cuyo pico máximo de absorción es de 540nm con un rango de 530 a 550 nm.