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arabera yessica lizeth Anzola 1 day ago

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PCR DIGITAL

La PCR digital es una técnica avanzada utilizada para cuantificar ADN y ARN viral con alta precisión y sensibilidad. Este método divide la muestra en múltiples particiones, donde la presencia de la diana se detecta mediante señales de amplificación.

PCR DIGITAL

PCR DIGITAL

PCR Tiempo real

La herramienta estándar para cuantificar el ADN del VIH y el ARN viral asociado a las células ha sido la PCR
¿QUE ES?

es una técnica avanzada de cuantificación que ofrece alta sensibilidad y precisión al proporcionar resultados absolutos. Este método se basa en la dilución limitante, donde las moléculas objetivo se destruyen aleatoriamente entre múltiples fracciones.

Plataformas de PCR digital

En la PCR digital la muestra se divide en múltiples particiones. Tras la amplificación por PCR, las particiones que contienen la diana producen una señal y se asignan como positivas

Retos y ventajas de la PCR digital de gotitas

Existen múltiples plataformas de PCR digital, pero en los últimos años, la QX200 se ha convertido en la plataforma de PCR digital más utilizada en todos los campos de investigación.

Lluvia – gota de fluorescencia intermedia

por las gotas con una fluorescencia intermedia, denominadas lluvia, que son difíciles de asignar a la población positiva o negativa lo que dificulta la cuantificación que afecta la separación de una gota positiva y negativa

Determinación del umbral

En la ddPCR, las gotitas generadas se identifican como positivas o negativas en función de un umbral a un determinado nivel de fluorescencia, y esta proporción se utiliza para calcular la abundancia de la diana mediante la estadística de Poisson. Por lo tanto, determinar un umbral correcto es crucial para una cuantificación fiable.

Aunque la terapia antirretroviral es capaz de suprimir la replicación del VIH en pacientes infectados, el virus persiste y rebrota cuando se interrumpe el tratamiento. Para encontrar una cura que pueda erradicar el reservorio latente, es necesario poder cuantificar el virus persistente.

ANTECEDENTES
Durante la terapia antirretroviral (TAR), el VIH puede persistir durante décadas en las células T CD4 + infectadas de forma latente como ADN proviral integrado en el genoma humano. Si se interrumpe la terapia antirretroviral, el reservorio proviral alimenta la viremia de rebote, por lo que se considera un obstáculo importante para la curación del VIH

Más recientemente, la PCR digital está ganando popularidad como un nuevo enfoque para la cuantificación de ácidos nucleicos, ya que permite la cuantificación absoluta del objetivo. Hoy en día existen varias plataformas comerciales de PCR digital que aplican el principio de la PCR digital,de las cuales la QX200 ddPCR de Bio-Rad es actualmente la plataforma más utilizada en la investigación del VIH.