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by Juan Pablo Perdomo Fonseca 3 years ago

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Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en microorganismos gram negativos

En el ámbito de la microbiología y la resistencia antimicrobiana, la hiperproducción de AmpC y la resistencia natural en microorganismos gram negativos son temas cruciales. La ausencia de genes reguladores y las mutaciones en genes atenuadores y promotores contribuyen a estos fenómenos.

Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en microorganismos gram negativos

Estudiantes: Baracaldo Zúñiga Juan Camilo, Bello Barragán Deisy, Camacho Gómez Valentina, Ceballos Achagua Juan David, Martinez Correa Laura Camila, Perdomo Fonseca Juan Pablo, Saenz González Angie Tatiana, Suarez Rodríguez Federico & Ubaque Valderrama Brayan Ricardo.

se conoce:

IMP y VIM

quelantes divalentes

EDTA, compuestos tiolicos o el ácido dipicolínico

ácido clavulánico, sulbactan y tazobactam

Todos los betalactámicos (excepto Aztreonam)

Funciona en:

por ejemplo

Deteccion de AmpC plasmidico

Metodos fenotipicos

*Especial de E. coli: Inducción de AmpC
Agar cefoxitina
Test en 3D
Discos combinados con inhibidores
Sinergia de doble disco

Microorganismos con AmpC constitutiva a bajo nivel

E. Coli

no expresan AmpC cromosomica natural

P. mirabilis
S. enterica
Klebsiella spp.

Producción de niveles basales "resistencia natural"

Hiperproducción de AmpC

Constitutiva

Mutaciones en gen atenuador y/o promotor

Ausencia de genes reguladores

abarcando:

se recomienda :

como

debido a

Gen blaAmpC

Inducible

Mutación de genes reguladores
Hiperproducción de AmpC

Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en microorganismos gram negativos

Carbapenemasas

OXA (grupo D)
países mediterraneos

ácido clavulánico, sulbactam o tazobactam

Clase A (2f)
KPC

penicilinas, cefalosporinas y carbapenémicos

Klebsiella pneumoniae, Pseudomona aeruginosa y Acinetobacter baumannii

Beta lactamasa SME

ácido clavulánico y tazobactam

carbapenémicos, aztreonam y cefalosporinas de 3ra y 4ta generación

Recomendación terapeútica
Caso OXA-48

Cefalosporinas de amplio espectro

Infecciones urinarias

Nitrofurantoina

Fosfomicina

colistina
Tigecilina
Diferenciación fenotípica
Métodos moleculares

Carbapemenasas tipo OXA

Pruebas de aproximación de discos o e-test

Sinergia con EDTA o con ácido dipicolínico

Añadir Zinc en caso de P. aeruginosa o A. baumannii

Metalo-betalactamasa

Sinergia con ácido borónico y con cloxacilina

Posible presencia de AmpC con pérdida de porinas o de carbapemenasa de clase A con AmpC

Sinergia con ácido borónico pero no con cloxacilina

KPC u otra carbapemenasa de clase A

Medios cromogénicos

Detección directa de muestras clínicas

CHROMagar

Detección de cepas con enzimas tipo VIM y KPC directamente de muestras rectales

Detección de BLEE

Cepas que tienen OXA-48

Clases A y B

Test de Hodge

Carbapenémico más adecuado

Meropenem y ertapenem

Falsos negativos

Cepas hiperproductoras de AmpC

Cepas productoras de CTX-M-15

Cepas con metalo-betalactamasa y oxacilinasas

Espectofotometro

Cuando los valores de CMI se incrementan

metalo-betalactamasas
clase B/ grupo 3 de Bush y Jacoby

Betalactamasas tipo AmpC

Alternativas a cefalosporinas de tercera generación
Detección de la producción de AmpC plasmidica
Sensibilidad disminuida o resistencia a alguna cefalosporina tercera generación
Tipos de producción
acido clavulánico, sulbactam y tazobactam
Cloxacilina, aztreonam y el acido bórico
Cefalosporinas de cuarta generación y carbapenémicos
Betalactamasas AmpC de espectro extendido

Cefalosporinas de cuarta generacion

Cefalosporinas de primera y segunda generación

Aminoglucósidos

detección de resistencia

sensibilidad intermedia a netilmicina y reduccion de halos de gentamicina y tobramicina

Enzima AAC (3)-II o AAC (3)-IV

gentamicina resistente y sensibilidad intermedia a tobramicina

enzima ANT (2")

gentamicina con halo disminuido (16-19mm) se considera como sensibilidad intermedia

enzima AAC (3)-I

sensible amikacina pero intermedia o resistente a tobramicina o netilmicina y sensible intermedia a amikacina

enzima AAC (6')

antibiograma selectivo
antibiograma completo

tobramicina

netilmicina

neomicina

Kanamicina

gentamicina

estreptomicina

amikacina

mecanismos de resistencia
participación de porinas y polisacáridos
excepto neomicina
Acetiltransferasas, fosfotransferasas, nucleotidiltransferasas

Resistencia a quinolonas

Detección de genes plasmidicos de resistencia
Sensibilidad a ácido nalidixico

La sensibilidad de ácido nalidixico y ciprofloxacina

Prueba de resistencia a quinolonas

Enterobacterias, Neisserias spp y Haemophilus

sensibilidad disminuida al ácido nalidixico (CMI 16-32 mg/L) y ciprofloxacino (CMI 0.25-1 mg/L)

Genes qnr u otros genes plasmídicos

Resistencia a ácido nalidixico (CMI>32mg/L) y sensibilidad intermedia o resistencia a ciprofloxacino (CMI> 1mg/L)

Mutación de gyrA o gyrA+ parC

Resistencia alta al ácido nalidixico y sensibilidad a ciprofloxacina

Posible mutación de gyrA

Mutaciones genes topoisomerasa
Region determinante de resistencia a quinolonas

QRDR

Resistencia de origen plasmídico
Baja resistencia

Selección de adicionales mecanismos

alta resistencia

Hiperexpresión de bombas de expulsión activa

Sistema AcrAB-TolC

Betalactamasas de espectro extendido

metodos cromogénicos
ChromID ESBL, Brilliance, Cica-beta-test
La actividad inhibitoria del ácido clavulánico
Tecnica disco de difusión

Discos combinados de cefalosporinas y ácido clavulánico en técnicas de microdilución para conocer la CIM

Pruebas Etest

tiras combinadas de cefalosporina con y sin inhibidor

Clase molecular A de Ambler
TEM, SHV y CTX-M principalmente

>300 BLEEs

Penicilinas, oximinocefalosporinas, defalosporinas de 3ra y 4ta y monobactámicos
Cefamicinas (cefoxitina) ni carbapenémicos

Betalactamasas resistentes a inhibidores

Piperacina-tazobactam
TEM-1 Y TEM-2
Inhibitor resistant mutant (IRT)
Inhibidores de betalactamasas
Aminopenicilinas, carboxipenicilinas y ureidopenicilinas
Enterobacterias
E. cloacae, E. aerogenes, C. freundii, M. morganii, S. marcescens
Detección fenotípica

Pruebas moleculares

patrones de resistencia

Subtopic

Antibiograma/Prueba de sensidisco

halos reducidos a cefalosporinas 4ta generación

menor sensibilidad a cefepima

Resistencia a amoxicilina-ácido clavulánico

Cefalosporinas 1ra generación

Ampicilina-sulbactam