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arabera Gabriela Lambert 3 years ago

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PCR convencional

A tecnologia de RT-PCR é fundamental na biologia molecular moderna, permitindo a análise detalhada de RNA em amostras. Este método é essencial para detectar e quantificar a presença de vírus e bactérias, bem como para analisar a expressão gênica e caracterizar transcritos.

PCR convencional

Detecta e Quantifica Vírus e Bactéria.

Determina estágios de câncer.

Genotipagem.
curva padrão

produto gênico conhecido e diluído seriamente

PCR EM TEMPO REAL OU PCR QUANTITATIVA- qPCR

O resultado é visualizado em Tempo Real durante a amplificação da sequência de interesse.

O equipamento excita um determinado comprimento de onda (sonda) por meio de LED ou laser
Se liga a dupla fita de DNA

Threshold cycle (ct)

Threshold

Quantifica a quantidade de DNA que possui na amostra.

Analisa a expressão gênica

RT- PCR

Analisa o RNA das amostras

Transcrição gênica e Caracterização dos transcritos.
Resultados: eletroforese de gel de agarose

Transcrição Reversa

O processo pode ser feito em duas etapas:
RT

PCR

RT+ PCR
É preciso produzir DNA a partir do RNA

PCR convencional

Ocorre em três etapas:

1. Desnaturação: alta temperatura de 95º C ocorra a separação da fita de DNA.
2. Anelamento: os primers se ligam as fitas moldes do DNA.

3. Extensão: A Taq DNApolimerase sintetiza novas fitas de DNA, baseando nas fitas iniciais do DNA sentido 5'-3'.

amplificação “in vitro” de uma região específica de DNA.

é utilizado para fazer muitas cópias de uma determinada parte do DNA.
utiliza apenas a DNA polimerase de organismos termófilos.

Diagnósticos.

Detecção de polimorfismos